论文部分内容阅读
1.研究目的 “证候”一词是中医学所独有的重要名词术语。中医主张先辨证后施治,可见能否正确认识、理解证候概念和本质,将直接影响到临床疗效。为此,长期以来有关证候方面的研究,一直是人们关注的焦点。伴随现代科技的迅猛发展,对证候本质的客观化、规范化认识也取得了相应的进展。从而引领中医证候的研究进入到崭新阶段。 随着科技的发展,肿瘤的生物治疗已经成为继手术、放疗、化疗、内分泌治疗以外的新疗法,为肿瘤的治疗带来了巨大转机。热休克蛋白70（heat shock protein70,HSP70）是一个强有力的免疫佐剂,它作为分子伴侣参与、促进和维持新生多肽的正确折叠,并调节细胞的生长、发育、分化、死亡。同时又作为一种内源性保护物质保护自身。HSP在体内能够与胞内多肽结合形成热休克蛋白-多肽复合物（heat shock protein-peptide complexes,HSP—PC）,诱导机体产生免疫抗瘤效应。 本课题从不同证候患者肺癌组织及远端正常肺组织中分离纯化HSP70-PC,观察肿瘤组织HSP70-PC的体外免疫抗瘤效应,并探讨其作用机理,扩展HSP70-PC应用于肿瘤免疫治疗的手段和研究思路;进一步深入探讨HSP70基因表达与中医热证的关系,为中医证的现代研究提供新的启示;通过观察不同证候肿瘤组织HSP70-PC对人类肺癌细胞的免疫抗瘤效应,确定其抗瘤效应存在证候相关性,从而对临床的合理应用及疗效提高奠定基础。 2.研究方法和结果 针对HSP70-PC的临床疗效的差异很可能与机体处于不同的证候状态有关的假设,本次研究侧重于阐明HSP70-PC对人肺癌细胞的免疫抗瘤效应影响机制的研究。研究分文献研究、实验研究、总论与结语四大部分。理论研究从古代文献和现代报道两方面探讨了中西医对证候的研究以及中西医对肿瘤治疗进展。实验研究由六个部分组成:人肺癌A—549细胞的培养、不同证候肺癌组织HSP70-PC的分离、纯化、不同证候肺癌HSP70-PC与DC成熟的关系、人肺癌细胞HSP70及凋亡相关基因Bcl-2表达的检测、流式细胞仪（FCM）检测各组肺癌细胞DNA周期分析、原位末端标记Tunel检测各组肺癌细胞凋亡情况。除常规病理外,采用放射免疫法观察HSP70-PC对肿瘤坏死因子（TNF-a）及白细胞介素-12（IL-12）含量的变化,免疫组化法并图像分析观察肺癌细胞热休克蛋白(HSP70、bcl-2)阳性表达的情况。 实验一 人肺癌A—549细胞的培养