目的：　　检测重症急性胰腺炎（SAP）病程中Treg／Th17平衡变化和Toll样受体4（TLR4）信号通路对SAP病生理过程的影响，以及大黄素的治疗效应。分析TLR4信号通路是否可通过影响Treg／Th17平衡，参与SAP发生发展，以及大黄素发挥效应的作用机制，深化对SAP病理生理机制的认识。　　方法：　　1、TLR4信号通路在SAP病生理机制中的作用:SPF级健康雄性C57/BL小鼠40只,TLR4基因敲除小鼠40只，体重均约20g，随机数字表法随机分为4组（n=20）:(1)对照组(Sham组)；(2)重症急性胰腺炎模型组（SAP组）;(3) TLR4-对照组(TLR4-Sham组)；(4) TLR4-重症急性胰腺炎模型组（TLR4-SAP组）。2、大黄素治疗SAP机制研究:SPF级健康雄性C57/BL小鼠60只,体重约20g，随机数字表法随机分为3组（n=20）:(1)对照组(Sham组)；(2)重症急性胰腺炎模型组（SAP组）；(3)大黄素治疗组（Emodin组）。受试动物喂养于室温约为（20-25）℃的动物实验室中，正常饲养一周，实验前禁食18 h，可自由饮水。采用雨蛙素联合脂多糖小鼠腹腔内给药的方法制备小鼠SAP模型。大黄素治疗组于制作SAP模型后经腹腔缓慢注射大黄素2.5mg/kg体重。观察术后48小时内各组小鼠死亡率，断颈处死小鼠，采用全自动生化分析仪检测小鼠血清淀粉酶、脂肪酶水平。HE染色方法检测胰腺组织病理学改变，酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清中TNF-α、IL-6、IL-10水平，流式细胞术检测各组小鼠Treg及Th17比例,实时荧光定量PCR方法检测Foxp3 mRNA、RORγt mRNA、IL-17mRNA的表达。　　结果：　　1、TLR4信号通路在SAP病生理机制中的作用　　1.1.Sham组及TLR4-Sham组小鼠腹腔注射生理盐水后仅有部分出现活动减少，其余小鼠呼吸平稳，活动及饮水均正常，大便成形，颜色为棕黑色，对外界刺激反应正常。SAP组小鼠在注射雨蛙素及脂多糖后，即出现呼吸频率增快、被毛凌乱且无光泽、活动倦怠、进食水减少、对外界刺激反应淡漠等症状，部分小鼠甚至出现腹泻症状。TLR4-SAP组小鼠造模后表现出活动减少，呼吸增快，饮水正常，被毛略显凌乱但有光泽，对外界刺激反应迟缓，未出现腹泻症状，一般状态较SAP组好转。　　1.2.Sham组及TLR4-Sham组48h内小鼠无死亡，死亡率为0％。SAP组12h、24h、48h累积死亡率分别为5%、10%、20%。TLR4-SAP组12h、24h、48h累积死亡率分别为0%、5%、10%。SAP组48h内累积死亡率较Sham组明显升高（P<0.05），而TLR4-SAP组较SAP组明显下降（P<0.05）。　　1.3.Sham组及TLR4-Sham组血清脂肪酶、血清淀粉酶水平比较无明显差异（P>0.05）。SAP模型组血清脂肪酶、血清淀粉酶明显高于Sham组（P<0.05），胰腺病理损害明显，组织学评分升高（P<0.05）；TLR4-SAP组较SAP组血清脂肪酶、血清淀粉酶均下降（P<0.05），同时胰腺病理损害减轻，组织学评分下降（P<0.05）。　　1.4.Sham组及TLR4-Sham组血清中TNF-α、IL-6、IL-10水平比较无明显差异（P>0.05）。SAP组血清中TNF-α、IL-6、IL-10水平显著高于Sham组（P<0.05）。而TLR4-SAP组以上血清因子指标较SAP组明显下降（P<0.05）。　　1.5.Sham组及TLR4-Sham组比较无明显差异（P>0.05）。与Sham组比较，SAP组Treg及Th17细胞比例均升高（P<0.05），且趋于Th17细胞占优势，故Treg/Th17比值降低（P<0.05），于此同时Foxp3 mRNA、RORγt mRNA、IL-17mRNA表达均增加（P<0.05）。而TLR4-SAP组Treg及Th17细胞比例较SAP模型组均降低（P<0.05），以Th17细胞尤为显著，所以Treg/Th17比值升高（P<0.05），并且Foxp3 mRNA、RORγt mRNA、IL-17mRNA表达均下调（P<0.05）。　　2、大黄素治疗SAP机制研究　　2.1.Sham组小鼠腹腔注射生理盐水后仅有部分出现活动减少，其余小鼠呼吸平稳，活动及饮水均正常，大便成形，颜色为棕黑色，对外界刺激反应正常。SAP组小鼠在注射雨蛙素及脂多糖后，即出现呼吸急促、被毛凌乱且无光泽、活动倦怠、进食水减少、对外界刺激反应淡漠等症状，部分小鼠甚至出现腹泻症状。Emodin组小鼠造模后表现出活动明显减少，呼吸增快，被毛竖立无光泽，对外界刺激反应迟缓，24h后较SAP组小鼠一般状态明显好转。　　2.2.Sham组48h内小鼠无死亡，死亡率为0%。SAP组12h、24h、48h累积死亡率分别为5%、10%、20%。Emodin组12h、24h、48h累积死亡率分别为0%、0%、10%。SAP组48h内累积较Sham组明显升高（P<0.05），而Emodin组较SAP组明显下降（P<0.05）。　　2.3.SAP模型组血清脂肪酶、血清淀粉酶明显高于Sham组（P<0.05），胰腺病理损害明显，组织学评分升高（P<0.05）；Emodin组较SAP组血清脂肪酶、血清淀粉酶均下降（P<0.05），同时胰腺病理损害减轻，组织学评分下降（P<0.05）。　　2.4.SAP组血清中TNF-α、IL-6、IL-10水平高于Sham组（P<0.05）。而Emodin组血清中TNF-α、IL-6、IL-10水平较SAP组明显降低（P<0.05）。　　2.5.SAP组Treg及Th17细胞比例较Sham组均升高（P<0.05），趋于Th17细胞占优势，故Treg/Th17比值降低（P<0.05），于此同时Foxp3 mRNA、RORγt mRNA、IL-17mRNA表达均增加（P<0.05）。而Emodin组Treg及Th17细胞比值较SAP模型组均降低（P<0.05），以Th17细胞尤为显著，Treg/Th17比值升高（P<0.05），并且Foxp3 mRNA、RORγt mRNA、IL-17mRNA表达减弱（P<0.05）。　　结论：　　1、SAP病生理过程中Treg与Th17细胞比例及功能活性升高，且以Th17细胞尤为显著，导致Treg/Th17失衡，引发细胞因子TNF-α、IL-6、IL-10及血清淀粉酶、脂肪酶水平升高，加重了胰腺病理损害，提高了小鼠的死亡率，从而Treg/Th17失衡可能是导致机体免疫平衡紊乱，加重SAP严重程度的重要原因之一。　　2、TLR4信号通路可通过影响Treg、Th17细胞比例及功能活性，致使Treg/Th17失衡，参与SAP免疫平衡紊乱的发生发展。　　3、大黄素能明显降低细胞因子TNF-α、IL-6、IL-10及血清淀粉酶、脂肪酶的水平，减轻胰腺病理损害，降低了小鼠的死亡率，同时能够降低Treg及Th17比例及功能活性，调节Treg/Th17平衡，改善机体免疫平衡紊乱，从而达到治疗SAP的效果。