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本实验应用体外肝细胞缺氧复氧模型研究肾上腺素能α受体激动剂去甲肾上腺素对肝细胞缺氧复氧损伤炎症因子及肝细胞增殖的影响。 方法:利用二步灌注法分离、纯化培养大鼠原代肝细胞,并行细胞计数并调整细胞浓度为2×105/mL及5×103/mL,然后接种于预先明胶包被的六孔板及96孔板,置于37℃、5%CO2的培养箱中用含10%胎牛血清,0.5mg/L胰岛素,1.0×10-7mol/L地塞米松,青霉素100U/mL,链霉素100U/mL的RPMI1640完全培养液培养24h后备试验用。将六孔板随机分为三组培养,N组(空白对照组);HR组(缺氧复氧组);NHR组(NE预处理组)。N组在正常细胞生长条件下进行常规培养,HR组及NHR组进行缺氧复氧损伤处理,缺氧复氧模型建立参照何英等[30]和高毅等[29]的模型建立的方法并加以改良。缺氧液:HR组为无糖无血清的RPMI1640培养液加入生理盐水;NHR组更换为无糖无血清的RPMI1640培养基含去甲肾上腺素(NE)终浓度为10μmol/L。缺氧培养4h后,复氧1h,2h,4h,8h后分别观察细胞生长情况,三组同时收集培养上清离心(3000转,15min)置-20℃保存,留作ELISA测定。96孔板的接种细胞孔随机分组,取HR组及NHR组俩组各个时间点之前2h加入CCK-8充分作用,测定OD值。 结果:应用缺氧复氧损伤模拟缺血再灌注损伤干预大鼠肝实质细胞后,损伤主要发生在复氧开始后。NE(10μmol/L)预处理后肝细胞培养上清IL-1β、IL-6蛋白的表达较缺氧复氧组显著增高,CCK-8结果显示在缺氧复氧损伤中,NE干预可明显促进肝细胞增殖。 结论:应激浓度的去甲肾上腺素能增加缺氧复氧损伤诱导大鼠肝细胞IL-6,IL-1β的表达,具有促炎效应。同时,NE具有促进肝细胞增殖的效应。