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目的:寻找乳腺癌的特异性分子标志是乳腺癌诊断和治疗的要点,非编码RNA作为新型靶点,在肿瘤治疗中的作用受到越来越多的关注。通过生物信息学分析寻找乳腺癌的特异性lncRNA标志物,发现AFAP1-AS1和是乳腺癌增殖和迁移的潜在标志物,miR-21是它的潜在靶点。旨在研究AFAP1-AS1对乳腺癌细胞增殖和迁移能力的影响,探讨AFAP1-AS1对miR-21是否具有靶向作用,阐明AFAP1-AS1参与乳腺癌进程的机制是否与调控miR-21/PTEN轴有关,以期为乳腺癌治疗寻找新的分子标志和有效靶点。方法:使用生物信息学方法寻找乳腺癌的lncRNA标志物;采用qRT-PCR检测mRNA的水平;Western blot实验检测蛋白的水平;采用LF-2000对乳腺癌细胞进行多种序列的瞬时转染。采用MTT、克隆形成和EdU实验检测乳腺癌细胞的增殖能力;划痕实验、Transwell实验检测乳腺癌细胞的迁移能力。采用RNA pull down实验研究AFAP1-AS1与miR-21的结合;通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-21对PTEN的靶向作用。用无胸腺裸鼠构建乳腺癌异种移植瘤模型,研究AFAP1-AS1稳定敲低对乳腺癌细胞体内生长的影响。结果:1.生物信息学分析结果显示AFAP1-AS1和miR-21在人体乳腺癌组织中异常表达,细胞水平与人体组织水平验证显示二者在乳腺癌组织和乳腺癌细胞中高表达;PTEN在乳腺癌组织和细胞中则呈现低表达。2.沉默AFAP1-AS1乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231细胞的增殖、迁移能力被显著降低。3.转染miR-21 mimic后乳腺癌细胞的增殖、迁移能力显著提高;转染miR-21 inhibitor后乳腺癌细胞增殖、迁移的能力显著降低。4.沉默AFAP1-AS1后miR-21的表达减少;RNA pulldown结果显示AFAP1-AS1与miR-21存在直接结合;沉默AFAP1-AS1后再恢复miR-21的表达,AFAP1-AS1对乳腺癌细胞增殖、迁移的作用被逆转。5.Western blot和qRT-PCR实验显示miR-21对PTEN的mRNA和蛋白水平具有负调控作用;荧光素酶报告基因实验显示miR-21对PTEN具有靶向调节作用。过表达miR-21后再恢复PTEN的表达,miR-21高表达对乳腺癌细胞的效应被逆转;低表达miR-21后再降低PTEN的表达,miR-21低表达对乳腺癌细胞的效应被逆转。6.沉默AFAP1-AS1可增加PTEN的mRNA和蛋白水平。沉默AFAP1-AS1后再恢复miR-21的表达,AFAP1-AS1对PTEN调节作用被逆转。7.用shRNA稳定敲低AFAP1-AS1,乳腺癌细胞在小鼠体内的生长速度显著减慢。结论:1.AFAP1-AS1和miR-21在乳腺癌细胞及人体乳腺癌组织中高表达,AFAP1-AS1在人体乳腺癌组织中的表达水平与患者的患病年龄成正比,有望成为乳腺癌早期筛选的分子标志物和临床治疗靶标。2.AFAP1-AS1对miR-21具有靶向正调控作用,并通过miR-21影响乳腺癌细胞的增殖和迁移。3.miR-21对PTEN具有靶向负调控作用,AFAP1-AS1沉默后通过下调miR-21的水平,升高抑癌基因PTEN的表达,参与癌细胞的增殖、迁移过程。