背景和目的:CD4+CD25+调节性T细胞(Regulatory T cell，Treg cell)是近年来逐渐被人们认识的一类具有免疫调节功能的T细胞亚群，在维持机体免疫耐受、移植免疫和肿瘤免疫逃逸等方面发挥着重要作用。研究发现在成人外周血中仅CD4+CD25highTreg细胞具有抑制功能。近年来的研究证实转录因子Foxp3是CD4+CD25+Treg细胞发育和发挥免疫抑制功能的关键因子。目前对CD4+CD25+Treg细胞的发生、发育、成熟以及功能的分子机制仍不十分清楚。 本研究首先通过检测新生儿脐带血CD4+CD25high调节性T细胞(Treg)数量及胞内转录因子Foxp3的表达，拟探讨Treg细胞在新生儿期的表达特点及与Foxp3的关系。其次通过观察经转化生长因子βl(TGF-β1)诱导的新生儿脐带血Treg细胞中Foxp3和IL-10表达特点，拟探讨TGF-β1在诱导产生的新生儿脐带血Treg细胞中的作用，从而为新生儿脐带血在免疫调节性疾病中的应用提供理论基础。 　　方法:1.采集新生儿脐带血和成人外周血获取单个核细胞后，在流式细胞仪上检测CD4+CD25highTreg细胞的数量及其胞内转录因子Foxp3的表达。2.脐带血单个核细胞用CD3mAb激活后，加IL-2培养扩增，同时加入不同浓度的TGF-β1干预，并以不加TGF-β1作为对照，扩增第4天分别用流式细胞术和RT-PCR技术检测扩增后的CD4+CD25+Treg细胞Foxp3蛋白和Foxp3mRNA的表达。3.脐带血单个核细胞经CFSE染色后，用CD3mAb激活同时加IL-2和5ng/mL TGF-β1扩增，分别于培养的第4、6、8天用流式细胞仪Cellquest软件获取数据，并用ModFit软件分析淋巴细胞各亚群的增殖动力学变化。4.用ELISA法检测CD3mAb激活同时加IL-2和不同浓度TGF-β1扩增后第4天培养上清液中细胞因子IL-10水平。 　　结果:1.新鲜脐带血Treg细胞占CD4+T细胞的比例(3.86±1.63％)明显高于成人外周血(0.87±0.74％)(P<0.01)；而脐带血Treg细胞中表达Foxp3的比例明显低于外周血Treg细胞(23.21±8.9％VS 71.3±11.6％，P<0.01)。2.脐带血单个核细胞培养后第4天用流式细胞术检测CD4+CD25+T细胞Foxp3表达，与对照组(31.64±7.59)％相比，lng/mL，5ng/mL，10ng/mL的TGF-β1处理组分别为(48.39±13.51％，P>0.05)， (61.35±6.79％，P<0.01)，(56.34±5.11％，P<0.05)。而在CD4+CD25hgihT细胞(以CD25荧光强度>102确定为CD25high表达的标准)中Foxp3表达分别是(69.28±3.91)％， (78.20±4.73)％，(69.96±8.48)％，明显高于对照组(47.18±8.13％，P<0.01)。3.RT-PCR检测Foxp3 mRNA的表达发现Foxp3/β-action的净光密度值比在对照组、lng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL TGF-β1组分别是：0.317：0.440：0.727：0.584。以5 ng/mLTGF-β1组Foxp3 mRNA表达量最高。4.流式细胞术Modifit软件分析5ng/mLTGF-β1处理组第4、6、8天CD4+CD25+Treg细胞增殖指数分别为：3.15，11.52，23.04；而CD8+T细胞分别为：2.16，4.23，5.43。第4天CD4+CD25+Treg细胞第5代到第6代所占的比例27.75％，CD8+T细胞仅为4.89％；第6天CD4+CD25+Treg细胞第5代到第8代所占的比例81.49％，CD8+T细胞为44.57％：第8天CD4+CD25+Treg细胞第8代到第10代所占的比例52.74％，CD8+T细胞为13.54％。在同一时间点CD4+CD25+Treg细胞增殖优于CD8+T细胞。5.分别收集1 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL TGF-β1处理组培养第四天的细胞上清液检测IL-10浓度(pg/mL)分别是(72.00±10.15)，(133.63±25.75)，(136.14±15.53)，明显高于对照组(49.92±10.37，P均<0.01)。 　　结论:1.虽然新生儿脐带血CD4+CD25highTreg细胞数量明显高于成人外周血：但其中Foxp3+细胞数量明显低于成年人，提示脐带血CD4+CD25highTreg细胞在功能上可能尚未成熟。2.在体外，TGF-β1能够促进脐带血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的增殖，且诱导Treg细胞分泌IL-10增加。