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本文以全齿复活线虫(Panagrellus redivivus)和秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)为靶标,对云南大学生物资源保护与利用重点实验室西南菌种资源库的329株木霉属(Trichoderma)菌株,进行了杀线虫活性筛选,对两株高活性菌株进行了杀线虫活性成分的分离和鉴定,主要结果如下:
1.对329株木霉属菌株,共12个种进行了杀线虫活性筛选,包括绿色木霉(T.viride)116株,哈茨木霉(T. harzinaum)68株,钩状木霉(T. hamatum)51株,长枝木霉(T. longbrachiatum)7株,帚状木霉(T.virens)7株,洋大戟草木霉(T.piluliferum)6株,云南木霉(T.yunnanensis)2株,多孢木霉(T. polysporum),康宁木霉(T. koningii),黑绿木霉(T. atroviride),致密木霉(T. compactus),贴生木霉(T.appressus)属各1株,以及未鉴定的135株。结果表明14株木霉真菌的发酵液对秀丽隐杆线虫(C. elegans)有活性(线虫死亡率>50%),15株木霉真菌的发酵液对全齿复活线虫(P. redivivus)有活性。其中,8株对全齿复活线虫(P. redivivus)和秀丽隐杆线虫(C. elegans)都有活性。8株木霉真菌的杀线虫活性超过80%。菌株1.02647(Trichodrama sp.)活性最强,48小时,全齿复活线虫(P. redivivus)和秀丽隐杆线虫(C. elegans)的死亡率分别为97.19%和96.39%。另外,菌株1.00416(T. viride)在72小时,对秀丽隐杆线虫(C. elegans)致死率为87.23%,全齿复活线虫(P. redivivus)为62.35%,挥发性杀线虫实验测定表明该菌含有挥发性的杀线虫化合物。因此选择菌株1.02647(Trichodrama sp.)和1.00416(T. viride)作为出发菌株,用PDB培养基进行扩大培养,对这两株菌的代谢产物进行深入。
2.从木霉真菌1.02647(Trichodrama sp.)的PDB发酵液中分离获得4个化合物。经波谱鉴定这几个化合物为trichodermin(MTJ1)、1α-isopropyl-4α,8-dimethylspiro[4.5]dec-8-ene-2β,7α-diol(MTJ2)、1α-isopropyl-4α,8-dimethylspiro[4.5]dec-8-ene-3β,7α-diol(MTJ4)、2β-hydroxy-1α-isopropyl-4α,8-dimethylspiro[4.5]dec8-en-7-one(MTJ6)。化合物MTJ1在400ppm浓度,72小时,全齿复活线虫(P.redivivus)、秀丽隐杆线虫(C.elegans)和松材线虫(B.xylophilus)的死亡率分别为98.1%、95.3%和54.2%。化合物MTJ2、MTJ4、MTJ6为新的倍半萜类化合物,抗肿瘤活性测定表明,lα-isopropyl-4α,8-dimethylspiro[4.5]dec-8-ene-3β,7α-diol(MTJ4)对细胞HL-60、A-549和MCF-7有抑制活性。
3.从木霉真菌1.00416(T.viride)的PDB发酵液中分离获得3个化合物,经波谱鉴定为6-pentyl-2H-pyran-2-one(MJY2),1β-vinylcyclopentane-1α,3α-diol(MJY6),4-(2-hydroxyethyl)phenol(MJY12)。其中1β-vinylcyclopentane-1α,3α-diol(MJY6)为新化合物。挥发性杀线虫活性测定表明化合物6-pentyl-2H-pyran-2-one(MJY2)在浓度为200 ppm时,作用时间为48小时,全齿复活线虫(P. redivivus)、秀丽隐杆线虫(C. elegans)和松材线虫(B.xylophilus)的死亡率分别为92.3%、90.53%、85.21%,我们首次报道了该化合物的挥发性杀线虫活性。