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盐胁迫是影响植物生长并造成农作物减产的主要环境因素之一。盐胁迫造成Na+在细胞质中大量积累的同时也往往导致K+的流失。K+参与很多细胞生理过程,如酶活性调节,蛋白折叠,渗透调节。过量的Na+会导致光合作用下降和光系统Ⅱ的光抑制,此外,叶绿体内的活性氧自由基(ROS)大量产生,质膜过氧化加剧。
SOS途径在植物耐盐胁迫的过程中具有重要的作用,ENH1参与一个新的盐胁迫响应途径,SOS2蛋白和类似SOS3的蛋白参与这个新的途径。但是ENH1对离子平衡的重新建立、光合作用的影响和ROS的清除机理仍不清楚。在本项研究中,我们克隆了番茄的ENH1基因,并在烟草中过表达该基因,研究了LeENH1功能,主要结果如下:
(1)利用GFP蛋白亚细胞定位分析,证明LeENH1的产物定位于叶绿体。利用实时定量PCR(qRT-PCR)分析表明,LeENH1在叶片中表达量最多,根中表达量最少,茎、花和果实中表达量较低。叶片中LeENH1受NaCl的诱导上调表达。
(2)获得转正义LeENH1基因烟草植株,盐胁迫下LeENH1过表达的烟草种子发芽率,幼苗的鲜重和干重比野生型高。转基因烟草叶片叶绿素含量、光合速率和最大光化学效率均比野生型高,这说明过表达LeENH1可以减轻盐胁迫对光合机构的破坏。
(3)在盐胁迫下,过表达LeENH1增强Na+排除细胞外和区域化积累到液泡中,并保持大量K+在细胞质中,从而建成新细的胞内离子平衡。
(4)烟草幼苗染色显示,转基因烟草受到盐胁迫后ROS含量比野生型少,与H2O2定量测定结果一致,说明过表达LeENH1的烟草植株能有效地清除ROS。植物主要利用抗坏血酸过氧化物酶(APX酶)以抗坏血酸(AsA)作为电子受体清除H2O2产生H2O,叶绿体中类囊体膜抗坏血酸过氧化物(tAPX)含量占APX酶一半。在盐胁迫下,转基因烟草tAPX酶活性比野生型高,这可能是转基因烟草体内ROS含量降低的主要原因。番茄