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背景:人喉鳞癌是头颈部最常见的恶性肿瘤之一,人喉鳞癌细胞的放疗抵抗是其放疗失败的根本原因。本课题组成员前期已成功构建原发性喉鳞癌放射抗拒细胞模型Hep-2max及原发性喉鳞癌放射敏感细胞模型Hep-2min,并证实鞘糖脂微结构域1相关磷酸化蛋白(phosphoprotein associated with glycosphingolipid microdomains 1,PAG1)介导人喉鳞癌原发性放射抗拒性状,但其机制还未明确。目的:本课题中我们将研究干扰PAG1对人喉鳞癌原发性放射抗拒细胞Hep-2max放射敏感性的影响,并初步探究其作用机制。方法:选用克隆形成试验验证本课题组成员前期构建的细胞模型的放射敏感性差异;采用荧光定量RT-PCR法检测PAG1及STAT3 mRNA的表达情况;采用Western Blot检测相关蛋白的表达变化;采用PAG1基因的干扰质粒shPAG1,阴性质粒shNC转染人喉鳞癌原发性放射抗拒细胞株Hep-2max,嘌呤霉素筛选转染的细胞株;采用流式细胞术检测干扰PAG1表达,经8Gy射线照射后细胞凋亡及细胞周期的变化情况,最后根据克隆形成实验结果判断细胞对射线的敏感程度。结果:克隆形成试验证实,前期本课题组成员构建的细胞模型Hep-2max与Hep-2min具有明显的放射敏感性差异。荧光定量RT-PCR结果显示,PAG1及STAT3 mRNA在Hep-2max中的表达高于Hep-2min。Western blot实验表明,PAG1及STAT3蛋白在Hep-2max中的表达高于其在Hep-2min中的表达。成功构建干扰PAG1表达喉鳞癌细胞株。荧光定量RT-PCR及Western blot实验表明,在人喉鳞癌原发性放射抗拒细胞中,干预PAG1表达可降低STAT3 mRNA及蛋白的表达。流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期分布,8Gy射线照射后,PAG1干扰组细胞凋亡比例较阴性质粒对照组明显增加,PAG1干扰组G2/M期细胞所占比例大于阴性质粒对照组,差异均有统计学意义(P>0.05)。最终,克隆形成实验结果证实,干扰PAG1表达可增加喉癌细胞对放射线的敏感性。结论:干扰PAG1表达可逆转喉鳞癌细胞的原发性放射抗拒,增加喉癌细胞放射敏感性,其机制可能与调控STAT3的表达、改变细胞周期分布、促进细胞凋亡有关,可能是喉鳞癌放疗增敏的潜在靶点。