目的:1、观察补肾健脾活血方对成骨细胞增殖矿化的影响;2、观察miR-210转染后对成骨细胞增殖矿化的影响;3、通过生物信息学分析miR-210调控骨质疏松症的靶基因、信号通路和分子机制。方法:1、补肾健脾活血方干预原代成骨细胞和miR-210转染原代成骨细胞:①配制不同浓度梯度补肾健脾活血方,然后干预原代成骨细胞,采用CCK-8检测成骨细胞活性;最佳浓度补肾健脾活血方干预原代成骨细胞,采用BCIP-NBT检测成骨细胞ALP表达;②分别用不同浓度miR-210转染原代成骨细胞,采用CCK-8检测成骨细胞活性;最佳浓度miR-210转染原代成骨细胞,采用BCIP-NBT检测成骨细胞ALP表达;RT-qPCR检测 Runx2、OPG、OPN、β-catenin mRNA 表达;2、基于生物信息学探讨miR-210调控骨质疏松症的作用机制:分析微阵列芯片GSE74209和GSE93883中miR-210的表达量,TargetScan、miRTarBase 和 miRDB 三大数据库预测 miR-210 靶基因,Gene、GenaCards 和 OMIM 三大数据库筛选骨质疏松症的靶点,通过映射寻找miR-210作用于骨质疏松症的靶基因,并完成靶基因的GO和KEGG富集分析,阐释其分子机制。结果:1、补肾健脾活血方干预原代成骨细胞和miR-210转染成骨细胞:①浓度为100-500ug/ml的补肾健脾活血方可以促进成骨细胞增殖,浓度为500ug/ml的补肾健脾活血方干预成骨细胞第3天其增殖作用最明显。②补肾健脾活血方干预原代成骨细胞后,ALP染色的阳性率高于对照组。③miR-210转染浓度为50nmol/L且时间为第2天时,成骨细胞增殖活性最强。miR-210干预原代成骨细胞,可以促进细胞增殖,促进成骨矿化,促进Runx2、OPG、OPN的表达。2、基于生物信息学探讨miR-210调控骨质疏松症的作用机制:①miR-210在骨质疏松症的骨组织和血液中差异表达。②miR-210作用于骨质疏松症的核心靶基因包括STAT1、MAPK1、CSF1、HIF1A、TFRC、BTK、HDAC4、PAX5、FOXP3、P4HB、SMAD4、APOA1、SYK、ARRB1、BDNF、CD38、CTTN、GBA、CIITA、TWIST1、RUNX3。③miR-210主要通过MAPK信号通路、cAMP信号通路、cGMP-PKG信号通路、PI3K-Akt信号通路、TGF-β信号通路、NF-κB信号通路参与调控骨质疏松症。结论:1、补肾健脾活血方干预原代成骨细胞,可以提高细胞活性和ALP染色阳性率,促进成骨矿化。miR-210转染成骨细胞后,可以提高ALP染色阳性率,促进Runx2、OPG、OPN的表达,促进成骨矿化。2、miR-210在骨质疏松症差异表达,其核心靶基因包括STAT1、MAPK1、CSF1、HIF1A、TFRC、BTK、HDAC4、PAX5、FOXP3、P4HB、SMAD4、APOA1、SYK、ARRB1、BDNF、CD38、CTTN、GBA、CIITA、TWIST1、RUNX3,主要通过 MAPK 信号通路、cAMP 信号通路、cGMP-PKG信号通路参与调控成骨矿化。