草鱼（Ctenopharyngodon idellus）是我国重要的淡水养殖品种之一，其以生长速度快，饲料来源广及肉质鲜美等优点而深受广大养殖者与消费者的欢迎。草鱼出血病是我国养殖草鱼鱼种阶段最为严重的病毒性疾病，其病原为草鱼呼肠孤病毒(Grass Carp Reovirus, GCRV)，给草鱼养殖业带来了巨大损失。草鱼出血病发病季节长、流行范围广、传播速度快、死亡率高，目前对该病主要以免疫预防与天然植物抗病毒药物治疗为主。草鱼出血病细胞疫苗制备主要以培养瓶贴壁培养方式培养病毒，是疫苗规模化生产的瓶颈因素。探索草鱼细胞与草鱼呼肠孤病毒新的规模化培养方法具有潜在的应用前景。鱼类疫苗的免疫途径包括注射免疫、浸泡免疫和口服免疫三种方式，其中，尽管浸泡免疫接种途径简单方便，但其免疫应答机理与免疫保护效果依旧需要深入研究。本论文针对草鱼出血病疫苗制备与应用过程中存在的关键技术问题，开展了草鱼细胞与呼肠孤病毒微载体培养技术以及浸泡免疫应答机理与效果的研究，旨在为草鱼出血病的有效防控提供新的技术途径。本论文主要内容如下：1.草鱼肾脏组织细胞（CIK）与GCRV微载体培养技术本论文研究与优化了草鱼CIK细胞在微载体Cephodex上培养条件，继而以微载体上生长的CIK细胞为基质研究了培养GCRV病毒的条件。结果表明，Cephodex是一种适合CIK细胞贴壁生长的微载体，倒置显微镜与扫描电镜观察均显示细胞生长状态良好，其最佳培养条件为：细胞贴壁期，以转速35rpm、每静置45min搅拌2min的间歇搅拌方式最佳，8h后细胞贴附率可达90%以上；细胞贴附期培养基中的血清浓度为5%；Cephodex微载体用量10mg/ml、细胞初始接种密度2.5×105cells/ml、连续搅拌速度40rpm时可获得最佳的细胞生长效能。用优化的最佳工艺条件大规模培养CIK细胞，接种感染复数为0.1的GCRV病毒3天后，培养细胞出现典型细胞病变效应，病毒滴度（LgTCID50/ml）为8.5。2.草鱼对GCRV灭活疫苗浸泡免疫的应答机理与保护效果使用微载体培养的GCRV制备灭活疫苗并免疫草鱼，在免疫后的7、14、21、28d分别从免疫试验组和对照试验组的试验鱼尾静脉采血，进行外周血的血细胞计数，测定白细胞吞噬活性、血清超氧化物歧化酶（SOD）活性和血清抗体效价，同时提取免疫鱼和对照鱼肝脏、脾脏和头肾3种组织中的总RNA并逆转录成cDNA，采用荧光定量PCR技术对不同组织中免疫相关基因IgM和Mx基因的表达进行分析。结果表明，浸泡免疫可以诱导草鱼血液中红细胞和白细胞数量的增加，显著提高血液中白细胞的吞噬活性和血清中SOD活力，增强草鱼的非特异性免疫功能；同时免疫鱼体内血清中的抗体效价也显著高于对照组，且在21d时抗体效价达到峰值，IgM和Mx基因在三种组织中的表达均呈现不同程度的上调，IgM基因在肝脏中的表达与对照组之间未出现显著性差异，在脾脏和头肾中的表达都显著高于对照组，分别在14d和21d达到峰值。Mx基因在免疫鱼肝脏中的表达于免疫后7、14d显著高于对照组，在脾脏和头肾中的表达于免疫后都显著高于对照组，且在免疫后14d达到峰值。IgM和Mx基因在脾脏和头肾中都有较大的表达量，而在肝脏中的表达量较小。免疫28d后攻毒试验结果表明免疫组的免疫保护率为76%。浸泡免疫可以通过草鱼血细胞增殖、提高白细胞吞噬活性、产生特异性抗体及提高免疫相关基因的表达量等方式增强机体的免疫保护力。