含标记基因稻曲病菌的构建及抑菌化合物/菌株的筛选

来源 :中国科学院大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:loughtjiang
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稻曲病是由稻曲病菌(Ustilaginoidea virens,可简写为U.virens)所引发的,危害水稻穗部。近年来,随着发病范围的扩大和病情的加重,稻曲病已经成为生产上的重要病害之一。为了有效地防治稻曲病,研究病原菌侵入水稻的途径及筛选有效的抑菌化合物或抑菌菌株十分重要。获得含标记基因的稻曲病菌,用其侵染水稻并实时追踪,是研究病原菌侵染途径的直接有效的方式。  构建了由gpd启动子(一段位于gpd基因5上游区的DNA序列,属于丝状真菌的组成型启动子)驱动、由TrpC终止子(来自构巢曲霉的终止子)终止的无内含子GUS标记基因的真菌表达载体,命名为pCAMBIA1301 GPD-GUS-TrpC,选择标记为潮霉素抗性基因Hyg,经实验室成员MebeasealassieAndargie证实其能在稻曲病菌中成功表达GUS基因,并且获得了59个含GUS基因标记的稻曲病菌(DQ1004)突变体;通过农杆菌介导法将含GFP基因标记的真菌表达载体pEX1-GAP-eGFP-SEQ(由华南农业大学植物病毒实验室提供)转入稻曲病菌DQ1004中,得到45个具有绿色荧光信号的阳性转化子。  筛选得到四种对稻曲病菌的生长有强烈抑制作用的化合物,编号分别为XX-1、XX-2、XX-6、XX-24;并通过平板对峙的方法,从118株菌株中共筛选出5株对稻曲病菌的生长有很强抑制作用的菌株,分别为SC874、SC886、SC897、SC1110、SC1169,其中前四个菌株还未鉴定,SC1169经鉴定为师岗链轮丝菌(Streptoverticillium morookaense)。
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