目的：　　2型糖尿病(T2DM)主要发病机制是胰岛素抵抗。“糖尿病炎症假说”得到越来越多支持，但对于T2DM中炎症体激活途径还存在疑问。近期在细胞水平发现，不同危险因素导致线粒体受损时，线粒体DNA(mtDNA)发生氧化，释放到胞质中，激活NLRP3(nucleotide-binding oligomerization domain andleucine-rich repeats containing pyrin domain3)炎症体，导致炎症的进一步发生发展。本实验通过T2DM模型检测NLRP3炎症体及凋亡相关通路激活情况，以期可以验证T2DM模型中存在氧化mtDNA激活NLRP3炎症体这条信号通路，并为发现T2DM诊断治疗方案及新的药物作用靶点提供可参考的理论依据。　　方法：　　1、使用db/db转基因小鼠，作为T2DM动物模型，并进行分组糖尿病组(DB/DB组)和正常对照组（CON组）。喂养期间对其体重和血糖（随机血糖、空腹血糖）进行检测，观察其变化，直到小鼠随机血糖值达到稳定状态后再进行后期处理。　　2、使用血糖试纸快速测定法，判断小鼠是否已达到糖尿病诊断标准(随机血糖＞11.1mmol/L)。对于达到糖尿病诊断标准的小鼠进行统一处死。　　3、利用苏木精-伊红染色（HE染色）对小鼠的肝脏组织进行染色，观察小鼠的炎症及脂肪肝变性情况。　　4、提取小鼠肝脏组织的原代细胞，使用试剂盒和流式细胞术，检测小鼠肝脏细胞线粒体膜电位、线粒体活性氧（ROS）含量。用于判别线粒体DNA氧化损伤水平。　　5、提取小鼠肝脏组织mRNA，利用逆转录、荧光定量PCR对NLRP3炎症体RNA水平表达情况进行检测。　　6、提取小鼠肝脏组织总DNA，利用普通PCR和琼脂糖凝胶电泳检测完整mtDNA的含量。　　7、提取小鼠肝脏组织总蛋白，调整浓度后，使用蛋白印记技术(Western Blot)检测NLRP3炎症体(NLRP3、Caspase-1、ASC)以及凋亡相关蛋白(p-P65、P65、P105、PARP、Caspase-3)的蛋白表达水平。使用凯基试剂盒可见光法，检测氧化应激相关指标，即谷胱甘肽-S转移酶(GSH-ST)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)。　　8、取小鼠血液，离心取血清。利用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定相关炎症因子(IL-1β、IL-18、TNF-α)血清表达情况。　　结果：　　1、db/db小鼠中的DB/DB组达到糖尿病诊断标准。处死前，DB/DB组体重、血糖均明显高于CON组。　　2、肝脏组织HE染色确认DB/DB组出现了大量的炎性细胞浸润、肝细胞脂肪变性明显，呈空泡状，有些肝细胞发生了明显的核固缩。CON组，肝小叶结构完整，小叶血管中有些充血，其他未见明显病理改变。　　3、流式细胞仪检测显示，DB/DB组原代肝细胞ROS水平、线粒体膜电位比值均高于CON组。　　4、荧光定量结果显示，DB/DB组肝组织的NLRP3炎症体(NLRP3、Caspase-1、ASC) mRNA水平均高于CON组。　　5、长片段mtDNA琼脂糖凝胶电泳检测显示，DB/DB组所提取的完整mtDNA的含量低于CON组。　　6、小鼠肝组织蛋白WB结果显示，NLRP3炎症体（Caspase-1、ASC）以及凋亡相关蛋白(p-P65、P65、P105、PARP、Caspase-3)的蛋白表达水平，DB/DB组比CON组表达增高。调亡相关目的蛋白表达水平检测，NF-KB和Caspase-3信号通路均被激活。　　7、可见光法结果显示，氧化应激指标(GSH-ST、CAT、MDA、SOD)，两组比较无明显差异。　　8、ELISA结果显示，血清中炎症因子(IL-1β、IL-18、TNF-α)表达，DB/DB组均高于CON组。　　结论：　　1、T2DM动物模型达到糖尿病标准，并在肝脏检测到炎症和脂肪肝变性。　　2、糖尿病进展中，发生了氧化应激，ROS促使mtDNA发生氧化，线粒体功能受损，可能由此触发后续炎症反应。但是，脂质过氧化不是很明显。　　3、糖尿病进展中NLRP3炎症体信号通路被激活，血清中炎症因子分泌增加。　　4、糖尿病进展中其他凋亡相关通路也发生了改变，NF-kb通路和Caspase-3也被激活。