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第一部分:目的:鉴定、验证Rab27b基因敲除小鼠模型的遗传性及观察其组织病理学改变。方法:采用Real time PCR方法对CRISPR/Cas9介导的Rab27b(-/-)转基因小鼠进行Rab27b基因的表达情况检测。同时采用HE染色观察野生型小鼠和敲基因小鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑组织病理结构变化。结果:经过PCR鉴定、验证,F0代成功的基因敲除小鼠能稳定遗传到F1代,扩繁后的Rab27b基因敲除小鼠无Rab27b蛋白表达;HE染色得出Rab27b基因敲除小鼠与正常小鼠无明显心、肝、脾、肺、肾、脑组织器官病理变化差异,可完全用于实验研究。结论:Rab27b基因敲除小鼠模型构建成功,具有稳定遗传性,经过扩繁后,可以顺利进行课题研究。第二部分:目的:观察锦红汤对Rab27b基因敲除小鼠脓毒症模型损伤的影响。方法:随机将120只Rab27b基因敲除小鼠分为4组:敲基因Rab27b(-/-)组、Rab27b(-/-)sham组、Rab27b(-/-)+CLP组、Rab27b(-/-)+CLP+JHT组,每组30只,另设野生型WT组30只对照,采用盲肠结扎法(CLP)建立Rab27b(-/-)小鼠脓毒症模型,术后Rab27b(-/-)+CLP+JHT组灌胃锦红汤,其余组灌胃等量生理盐水,观察术后4h和72h各组的体重、生存率、PLT、PT、APTT、TT、FDP、ALT和Cr的变化。结果:术后4h和72h,野生WT组、敲基因Rab27b(-/-)组和Rab27b(-/-)sham组间的体重、生存率、PLT、PT、APTT、TT、FDP、ALT和Cr不存在统计学差异(P>0.05)。术后4h和72h,Rab27b(-/-)+CLP组和Rab27b(-/-)+CLP+JHT组精神状态萎靡,饮食量少,不活跃,趴着不动。Rab27b(-/-)+CLP组和Rab27b(-/-)+CLP+JHT的体重在各组间均无明显差异(P>0.05)。术后72h,Rab27b(-/-)+CLP组存活率为46.65%,Rab27b(-/-)+CLP+JHT组存活率为63.35%,但两组间不存在统计学差异(P>0.05);术后72h,Rab27b(-/-)+CLP+JHT组的PLT计数显著性高于Rab27b(-/-)+CLP组(P<0.05);术后4h的Rab27b(-/-)+CLP组的PLT计数高于术后72h Rab27b(-/-)+CLP组,但不存在统计学差异(P>0.05);术后72h,Rab27b(-/-)+CLP组的TT显著高于其他组(P<0.05);Rab27b(-/-)+CLP+JHT组的TT显著性低于Rab27b(-/-)+CLP组(P<0.05);术后72h,Rab27b(-/-)+CLP组的DD显著高于其他组(P<0.05);Rab27b(-/-)+CLP+JHT组的DD显著性低于Rab27b(-/-)+CLP组(P<0.05)。结论:敲基因Rab27b(-/-)造模后主要表现为血小板数量明显降低,TT、DD、FDP明显升高,肝肾功能损伤明显,而后体重、PT和APTT变化不是很明显。经锦红汤治疗,发现72小时小鼠的血小板数量、凝血功能和纤溶功能改善显著。第三个部分:目的:观察锦红汤对Rab27b基因敲除小鼠盲肠结扎模型血小板功能的影响及机制。方法:随机将120只Rab27b基因敲除小鼠分为4组:敲基因Rab27b(-/-)组、Rab27b(-/-)sham组、Rab27b(-/-)+CLP组、Rab27b(-/-)+CLP+JHT组,每组30只,另设野生型WT组30只对照,采用盲肠结扎法建立Rab27b(-/-)小鼠脓毒症模型,术后Rab27b(-/-)+CLP+JHT组灌胃锦红汤,其余组灌胃等量生理盐水,观察术后4h和72h各组的透射电镜、5-HT(致密颗粒分泌能力)、流式细胞仪检测P选择素表达率、激光共聚焦显微镜、Real time PCR技术和Western blot技术检测Rab27b的变化。结果:术后4h和72h,电镜结果显示:野生型WT组、敲基因Rab27b(-/-)组、Rab27b(-/-)sham血小板表面光滑,无伪足形成,血小板胞质中α颗粒分布均匀;野生型WT组、敲基因Rab27b(-/-)组、Rab27b(-/-)sham组的5-HT和P选择素不存在差异(P>0.05);术后4h和72h,野生型WT组的5-HT浓度极显著的高于其他所有组(P<0.01);Rab27b(-/-)+CLP组和Rab27b(-/-)+CLP+JHT组的5-HT浓度极显著低于Rab27b(-/-)组和Rab27b(-/-)+sham组(P<0.01);术后4h和72h的Rab27b(-/-)+CLP组的5-HT浓度不存在统计学差异(P>0.05);但是术后72h,Rab27b(-/-)+CLP+JHT组的5-HT浓度显著性高于Rab27b(-/-)+CLP组(P<0.05)。P选择素呈现于5-HT恰好相反的趋势。采用免疫荧光技术、Real time PCR技术和蛋白印迹技术检测术后4h和72h,野生型WT组的血小板Rab27b基因和蛋白阳性率极显著高于其他组;敲基因Rab27b(-/-)组、Rab27b(-/-)sham组、Rab27b(-/-)+CLP组和Rab27b(-/-)+CLP+JHT无Rab27b阳性表达。结论:敲基因Rab27b(-/-)造模后电镜结果主要表现为血小板伪足数量增多,且血小板胞质中α颗粒分布不均匀,向血小板膜移动,释放更多α颗粒;Rab27b(-/-)组造模后5-HT明显降低,经过锦红汤的治疗,5-HT浓度增加,且治疗时间越久效果越好。P选择素呈现于5-HT恰好相反的趋势。敲基因Rab27b(-/-)组、Rab27b(-/-)sham组、Rab27b(-/-)+CLP组和Rab27b(-/-)+CLP+JHT无Rab27b阳性表达。经过锦红汤治疗后也没有任何变化,说明Rab27b敲除后血小板上的Rab27b无法表达,也无任何疗效,说明脓毒症的治疗依赖Rab27b的调节