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第一部分PLCε在RCC中表达及其临床意义目的探讨PLCε(phospholipase C epsilon)在肾细胞癌(Renal cell carcinoma, RCC)中表达及其与临床病理之间的关系。方法采用RT-PCR法检测PLCε基因在肾细胞癌(33例)组织及相应癌旁组织中mRNA表达并分析其与临床病理分期分级的关系。结果PLCεmRNA在肾细胞癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织(P<0.001), PLCεmRNA表达与RCC临床分期有关(P<0.05),而与病理分级无关(P>0.05)。结论PLCεmRNA在肾细胞癌组织中表达明显增高,且与临床分期有关,推测PLCε可能与RCC发生发展有关。第二部分PLCε对肾细胞癌786-0细胞增殖作用的影响目的检测shRNA PLCε转染肾细胞癌786-0细胞后对细胞增殖作用的影响并分析其可能的分子机制方法采用RT-PCR和Western blot法检测肾细胞癌786-0细胞转染shRNA PLCε后PLCε、NF-κB、COX-2和c-myc mRNA和蛋白表达的变化。并用Western检测NF-κB核蛋白和胞浆蛋白表达的变化。MTT法及平板克隆形成实验检测shRNA PLCε对786-0细胞增殖的抑制作用。细胞免疫荧光检测shRNA PLCε转染786-0细胞后NF-κB核蛋白转位情况。结果RT-PCR和Western blot结果显示shRNA PLCε能明显抑制PLCε、NF-κB、COX-2和c-myc mRNA和蛋白表达,并抑制NF-κB胞浆与胞核蛋白的表达。MTT和平板克隆形成实验结果显示shRNA PLCε能明显抑制786-0细胞增殖。细胞免疫荧光显示,shRNA PLCε抑制NF-ΚB蛋白表达。结论shRNA PLCε可能是通过下调NF-κB、COX-2和c-myc基因和蛋白表达来抑制肾癌786-0细胞增殖的。第三部分NF-κB特异性抑制剂BAY11-7082对786-0细胞增殖的影响目的探讨NF-κB特异性抑制剂BAY11-7082抑制786-0细胞增殖及NF-κB总蛋白、胞浆与胞核蛋白以及COX-2和c-myc蛋白表达的情况,以进一步验证PLCε是否是通过NF-κB来抑制786-0细胞增殖及COX-2和c-myc蛋白表达。方法分别用不同药物浓度的BAY11-7082处理786-0细胞,MTT法与平板克隆形成实验检测BAY11-7082对细胞增殖的影响,采用Western blot法分别检测BAY11-7082处理前后NF-κB总蛋白、核蛋白和胞浆蛋白、COX-2和c-myc蛋白表达情况。免疫荧光检测BAY11-7082对NF-κB核蛋白转位的影响。结果BAY11-7082具有抑制肾癌786-0细胞增殖的作用。Western blot结果显示BAY11-7082能明显抑制COX-2和c-myc蛋白的表达(P<0.01),但并没有抑制NF-κB蛋白的表达(P>0.05),因此,我们进一步检测NF-κB胞浆与胞核NF-κB蛋白,发现其抑制了NF-κB胞核蛋白的表达(P<0.01)。结论BAY11-7082可能是通过抑制胞核NF-κB蛋白的表达来抑制COX-2和c-myc基因和蛋白的表达进而达到抑制786-0细胞增殖的。