微拟球藻富含极性脂形式(磷脂和糖脂)的二十碳五烯酸(EPA),这些极性脂具有良好的乳化性和生物利用度,在食品、医药和化妆品领域具有很大的应用潜力。由于微拟球藻细胞体积较小,细胞壁坚韧,破壁困难,且叶绿素a含量高,严重制约对其极性脂的利用。因此,亟需选择一种适宜于该藻的叶绿素脱除、破壁提取极性脂和极性脂分离的方法,以有效提高极性脂利用率。针对以上问题本文首先对微拟球藻藻粉进行皂化预处理,再利用酶辅助破壁三相分配萃取法提取总脂,最后利用乙醇分离纯化得到高纯度的极性脂,得到以下结果:(1)微拟球藻皂化脱除叶绿素对比物理吸附、氧化脱色和柱层析法处理微拟球藻脂质提取物中叶绿素,发现藻粉直接皂化预处理叶绿素脱除的效果更好。为保证叶绿素去除率和脂质保留率,以这两项为优化条件进行脱色工艺探究,在单因素实验的基础上,再利用Plackett-Burman试验和Box-Behnken试验优化皂化预处理的工艺,所得优化工艺条件为:皂化剂为无水乙醇+1%Na OH(1:4,v/v),藻粉与皂化剂的料液比为1:4,处理时间为78 min、处理温度为70℃。经过皂化预处理后,藻粉中叶绿素去除率和脂质保留率分别为95.05%和89.12%,脂质提取物呈亮橙色,脱色效果良好。(2)微拟球藻酶法破壁和总脂提取选用简单、高效且条件温和的酶辅助三相萃取提取微藻脂质。首先对微拟球藻细胞壁进行检测分析可知含有68.32%纤维素、12.64%半纤维素、8.68%果胶和10.33%其他成分,通过对比选用纤维素酶和半纤维素酶的复合酶体系破壁;再经过单因素试验和中心正交设计试验,得到最佳酶解工艺条件为:纤维素酶用量8.7 mg/g、半纤维素酶用量5.0 mg/g、酶解温度50.5℃、酶解p H值5.0、酶解时间208 min;最后利用三相萃取得到微拟球藻总脂,提取率为36.7 g/100 g干藻粉。(3)乙醇分离纯化极性脂的研究为进一步提高极性脂的纯度,需要对提取脂质中的极性脂进行分离纯化。采用单因素试验和正交试验确定乙醇分离纯化极性脂的最佳工艺条件为:乙醇浓度80%、料液比1:8、提取温度55℃和提取时间3 h。获得的极性脂纯度为73.6%。对影响极性脂纯度的因素主次进行分析,其顺序为:乙醇浓度>料液比>提取时间>提取温度。最后从分离纯化得到的微拟球藻极性脂提取物中共鉴定出101种不同脂质类别的脂质组分,包括15种甘油三脂、21种甘油糖脂、34种甘油磷脂,总EPA含量占极性脂的10.2%。本论文以微拟球藻藻粉为原料,研究了微拟球藻叶绿素脱除、脂质提取与极性脂分离方法,并对极性提取物进行了鉴定,为以微拟球藻来源的极性脂EPA形式的营养品、保健食品等商业化应用奠定了坚实的基础。