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2000年以来,由H5亚型AIV引起的禽流感在我国部分地区流行,致死对象不仅有鸡,还有水禽—鸭和鹅,给养禽业造成了很大的危害。本研究有目的地选取了于本次流行中分离到的三株不同来源的H5N1亚型AIV:两株水禽分离株—番鸭分离株ZM、鹅分离株SG和鸡分离株JC,进行了生物致病性的研究。 参照美国判定AIV致病力的标准,用JC株、ZM株、SG株经静脉途径分别接种27日龄鸡,35日龄鹅,35日龄肉鸭,11日龄番鸭、绍鸭、肉鸭,43日龄鸽;肌肉途径接种26日龄鹌鹑、29日龄鹧鸪。三个毒株依次在19-28、15-39、39-67小时致鸡的死亡率为100%;在16-40、16-63、48-88小时致鹌鹑的死亡率也为100%;在74-87、24-87、92-185小时致鹧鸪的死亡率分别为62.5%、75%、50%。JC株、ZM株分别在62-148、39-109小时致死鹅100%、87.5%;在41-214、61-214小时致死11日龄番鸭达62.5%、75%。ZM株在69小时致死绍鸭1只,死亡率为12.5%。SG株接种鹅和番鸭,JC株、SG株接种绍鸭,JC株、ZM株、SG株接种鸽、35日龄肉鸭、11日龄肉鸭,死亡率均为0。 死亡禽只生前精神沉郁,食欲下降,腹泻;部分番鸭和鹅神经症状明显,眼结膜潮红,喙肿发绀,脚蹼底发绀;部分患鸡鸡冠肿胀,基部发绀。剖检以全身组织器官的出血为主,常可见胰腺的坏死;鸡、番鸭、鹅的脾脏、法氏囊、胸腺、盲肠扁桃体有肿大、萎缩、出血等严重病变。组织学方面有脑充血、水肿,心肌出血,肝、肾、肺淤血、出血,胰腺腺上皮坏死,消化道黏膜上皮坏死脱落,免疫器官内淋巴细胞坏死、数量减少等主要病理表现。所有存活禽只外观均无明显病症,扑杀后部分组织器官内可见轻度的病理损伤。 以上结果表明JC株、ZM株、SG株对鸡、鹌鹑具有很强的致病性,对鹧鸪的致病性也很强,但三个毒株对肉鸭、鸽的致病性却不明显;JC株、ZM株对鹅和番鸭具有很强的致病性,但SG株对鹅的致病性却很弱。ZM株对绍鸭显示了致病力,但JC株、SG株却没有。说明致病性是由宿主和毒株两方面因素决定的。 提取JC株、ZM株、SG株的基因组RNA,利用RT-PCR技术成功扩增出与预期设计的1.7kb大小相符合的HA基因特异条带,将扩增产物提纯后克隆入pGEM~R-T载体,进一步进行了序列测定。序列分析表明所扩增的3个毒株HA基因片段长度均为1732bp,包含的完整阅读框架长度为1707bp,共编码568个氨基酸。JC株、ZM株、SG株HA裂解位点处均具有多个碱性氨基酸,序列为R-R-谢静HSNI亚型禽流感病毒致病性及HA基因的初步研究R一K一K一R,从分子水平显示这三个毒株是高致病力毒株。序列同源性分析结果显示,这三个毒株之间HA基因核营酸与氨基酸的同源率分别为98.3%一99.2%、97.5%一98.8%。三个毒株与国内早期HSNI亚型分离株GDI/96、GD3/97之IbJ HA基因核昔酸与氨基酸同源率分别为97.8%一99.0%、97.4%一98.6%。说明这几个毒株HA基因亲缘关系极为相近。 以HA基因编码区序列为基元,构建HS亚型AIV分离株的遗传发生树。结果表明5个内地分离株与97香港分离株的HA基因处于一个进化分枝,核营酸同源率为%.5%一98.6%,说明两者之间HA基因的遗传演化关系极为密切。