目的：第一部分：（1） 观察氯化钴（CoCl₂）及HIF-1α过表达对乳鼠心肌细胞及人宫颈癌Hela细胞存活及凋亡状况的影响。（2） 观察CoCl₂模拟的低氧以及由pcDNA3-HIF-1α真核表达质粒转染介导的HIF-1α过表达对乳鼠心肌细胞和Hela细胞中HGF／c-Met系统mRNA和蛋白表达的调节。（3）对人HGF基因启动子区进行生物信息学分析，寻找可能介导HGF低氧表达调控的转录因子作用位点。第二部分：根据生物信息学分析结果，在Hela和转染效率较高HEK293细胞中，研究HIF-1α对TGF-β2基因表达调控的作用机制，并进一步观察重组转化生长因子-β2（transforming growth factor-β2，TGF-β2）对Hela细胞中HGF表达的影响， 方法：第一部分：（1） 体外培养乳鼠原代心肌细胞和Hela细胞，应用MTT和流式细胞仪检测CoCl₂对乳鼠心肌细胞和Hela细胞存活、增殖及凋亡的影响。（2） 构建pcDNA3-HIF-1α真核表达质粒（3） 免疫印迹检测CoCl₂和pcDNA3-HIF-1α质粒转染诱导的HIF-1α过表达后，Hela细胞中凋亡相关蛋白Bc1-2和Bax的表达。（4）RT-PCR检测100μmol／L CoCl₂作用6～72h后，心肌细胞中HGF mRNA的表达。（5）Western Blot检测100gmol／L CoCl₂作用心肌细胞12h后HIF-1α蛋白的表达。（6） 相对荧光实时定量PCR检测CoCl₂和pcDNA3-HIF-1α质粒转染后，Hela细胞中HGF／c-Met mRNA的表达。（7） ELISA检测CoCl₂对Hela细胞中分泌性HGF蛋白表达的影响。（8） 利用生物信息学分析人HGF基因启动子区可能的转录因子结合位点。第二部分：（1） 构建pGL3-EPO-HRE荧光素酶报告质粒和pGL3-TGF-β2及其五个突变体的荧光素酶报告质粒。（2） Western Blot和双荧光素酶报告基因法检测CoCl₂和pcDNA3-HIF-1α质粒转染后，Hela和HEK293细胞中HIF-1α蛋白的表达量及其DNA结合活性。（3） 相对荧光实时定量PCR检测250μmol／L CoCl₂单独作用Hela和HEK293细胞6h后，TGF-β2mRNA的表达，以及CoCl₂处理和pcDNA3-HIF-1α质