【摘 要】
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油茶（Camellia oleifera Abel.）是多年生常绿灌木或乔木,原产于中国,具有悠久的栽植历史和广泛的种植面积,是重要的木本油料经济作物。我国已成功选育了一些优良无性系,如江西省赣州市林科所的“赣州油系列”,但选育的优良无性系之间遗传背景较狭窄,幼苗及种子等离体材料难以根据形态特征进行辨别,严重影响到赣南油茶系列产品的推广以及我国油茶良种化进程。本研究通过对赣南油茶进行转录组测序,开
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油茶（Camellia oleifera Abel.）是多年生常绿灌木或乔木,原产于中国,具有悠久的栽植历史和广泛的种植面积,是重要的木本油料经济作物。我国已成功选育了一些优良无性系,如江西省赣州市林科所的“赣州油系列”,但选育的优良无性系之间遗传背景较狭窄,幼苗及种子等离体材料难以根据形态特征进行辨别,严重影响到赣南油茶系列产品的推广以及我国油茶良种化进程。本研究通过对赣南油茶进行转录组测序,开发具有多态性的SSR分子标记,并对其SSR-PCR反应体系进行了优化,对赣南油茶19个品系进行了遗传多样性分析,并构建了指纹图谱进行分子鉴别。主要结果如下:对GLS赣州油4号、赣州油9号、赣州油23号、单籽油茶、攸县油茶、越南油茶进行转录组测序,共获得38.43 Gb数据,总长度、平均长度、N50以及GC含量分别为115 860 769 bp、963 bp、1 569 bp和42.10%;共获得120 202个Unigenes,在Nr、Nt、Swiss Prot、KEGG、KOG、Pfam、GO数据库中进行Blast比对,分别比对到89 522、91 640、59 200、63 239、61 777、57 869、66 370个Unigenes;检测出64 399个CDS,利用MISA软件共检测到了50 519个SSR位点分布于34 550个Unigenes,SSR的出现频率为42.03%,平均距离为2.29 kb,基序类型丰富,以二核苷酸重复为主。采用正交实验设计对赣南油茶SSR-PCR反应体系进行了优化,得到最优反应体系总体系为20μL:2×Taq PCR Master mix 9μL、dd H2O 7μL、正反引物各1.5μL、DNA模板1μL。根据SSR位点利用Premier 3设计了29 122对引物,筛选获得201对引物,经琼脂糖凝胶电泳初筛发现有86对SSR引物能稳定扩增,毛细管电泳复筛得到21对引物扩增结果较稳定、多态性较好。利用开发的21对EST-SSR分子标记对19个赣南油茶群体共265份种质进行了遗传多样性、遗传分化、遗传结构分析及DNA指纹图谱的构建。从整体上的分析看赣南油茶群体的遗传多样性较丰富,绝大部分品系间存在中等程度的遗传分化,部分品系间的亲缘关系较近。通过AMOVA分析发现赣南油茶的遗传变异多发生在群体内。基于贝叶斯模型的Structure遗传结构分析将19个赣南油茶品系分为3类,并没有完全按品系进行划分且赣南油茶品系间杂合程度较高。UPGMA聚类分析发现在遗传距离0.12附近时,可分为赣州油16号（S16）和其它赣南油茶品系两类。利用引物组合法构建了赣南油茶品系的指纹图谱,可将19个赣南油茶品系区分开。综上,本研究开发了21对EST-SSR分子标记,为今后相关研究提供了丰富的标记来源,利用EST-SSR分子标记对赣南油茶有效地进行了遗传多样性等分析,并构建了相应的指纹图谱,为准确快速地鉴别赣南油茶提供了分子依据,有助于加快赣南油茶分子标记辅助育种工作进程及对其进一步的开发利用。
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