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目的:本课题拟通过寻找mir-148a的靶基因,验证mir-148a与靶基因之间的相互作用并研究其对神经胶质瘤细胞迁移和侵袭能力的影响。方法:1、运用生物信息学预测软件TargetScan、miRanda、PicTar、PITA筛选和预测mir-148a的靶基因;2、运用生物素标记的RNApull down筛选mir-148a的靶基因;3、运用荧光素酶报告基因验证mir-148a的靶基因;4、运用荧光定量PCR和Western Blot的方法检测GADD45在mir-148a过表达和抑制表达稳定细胞系中的基因和蛋白表达水平;5运用transwell迁移和侵袭实验、划痕实验来验证mir-148a通过靶向调控GADD45促进神经胶质瘤的迁移和侵袭作用。结果:1、生物信息学预测软件TargetScan、miRanda、PicTar、PITA分别预测mir-148a的靶基因434个、7402个、434个、1847个,根据预测网站的评分及同源序列对比和互补,初步预测MEOX2-1、MEOX2-2、GADD45A-1、GADD45A-2、AG04、DLGAP1 为 mir-148a 的潜在靶基因。2、生物素标记的RNApull down结果表明,以DNMT1为阳性对照,初步筛选只有GADD45A-2是mir-148a的靶基因。3、荧光素报告基因活性检测的结果证实,mir-148a能与GADD45 3’UTR区结合,抑制其报告基因的荧光强度,这些结果确证,miR-148a通过GADD45A基因3’UTR上的该位点来调控基因的表达,GADD45是mir-148a的靶基因。此外,qRT-PCR和Western Blot实验的结果表明,与正常神经胶质细胞相比,GADD45在神经胶质瘤细胞系的表达明显下调,且差异具有统计学意义(P<0.05)。4、通过构建GADD45过表达慢病毒载体(pLent-GADD45),感染神经胶质瘤U251、U87细胞系,建立了 GADD45过表达稳定细胞系。5、利用荧光定量PCR和Western Blot分析,验证了 mir-148a过表达下调GADD45基因和蛋白表达,mir-148a抑制表达时结果相反。这些结果证明mir-148a对GADD45存在调控作用。6、构建过表达GADD45慢病毒载体(pLent-GADD45),感染神经胶质瘤U87、U251细胞系后进行transwell迁移和侵袭实验、划痕实验,发现过表达GADD45减弱U87、U251的迁移和侵袭能力。结论:1、GADD45 是 mir-148a 的靶基因;2、mir-148a通过靶向调控GADD45促进神经胶质瘤细胞的迁移和侵袭。