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目的:ARDS作为威胁人类生命的一个常见危重症,对人类的健康造成了威胁。半个世纪以来,ARDS一直备受各国政府、医学界的高度关注。尽管呼吸机可有控制ARDS的进展,但最快和最容易实现的治疗方法是药物治疗,糖皮质激素(glucocorticoid,GC)用于治疗急性呼吸窘迫综合症(acute respiratory distresssyndrome,ARDS)已有多年历史,理论上GC的抗炎等作用对ARDS有效,但部分病人对GC疗效不佳。临床研究中对GC褒贬不一,至今未有一致结论。长期以来认为糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)的减少是ARDS时机体产生GC抵抗的主要机制。尽管有关GR的研究已较深入和充分,但目前尚未解决ARDS的GC抵抗问题。仅从受体水平研究存在局限,需要开拓新的研究方向,寻求突破。在GC抵抗中GC似较GR具有更为重要,我们推断细胞内GC的相对或绝对不足是ARDS对GC疗效不佳的一个重要原因。11β-羟基类固醇脱氢酶(11β-hydroxysteroid dehydrogenase,11β-HSD)是受体前调节糖皮质激素作用的关键酶。分为11-βHSD1和11-βHSD2两种亚型。11β-羟基类固醇脱氢酶1(11β-hydroxysteroid dehydrogenase type1,11β-HSD1)催化无活性的可的松到有活性的皮质醇。本课题为深入研究GC的受体前调节,验证11β-HSD1在炎性损伤细胞中的作用,从而寻找GC抵抗的可能原因。方法:本实验先在临床中回顾性研究近4年住我科重症肺炎所致ARDS病人的治疗中用GC组及非GC组效果相关指标比较,包括患者转归、呼吸机使用时间、肺部感染严重程度指数、肺部阴影吸收指数,氧合指数PaO2/FiO2,休克的相关监测指标等。对GC对ARDS的临床治疗效果进行简单评估。然后在体外通过LPS分别刺激人体肺腺癌上皮细胞系(A549)、人脐静脉血管内皮细胞株(ECV304)、原代人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC),根据测定不同时间、不同浓度脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激细胞后IL-6分泌量,从而筛选合理性损伤模型,并对目的细胞进行鉴定。然后从基因分子水平分别构建pcDNA3.1myc/his-11β-HSD1的真核表达载体及从公司合成11β-HSD1-siRNA (SmallinterferingRNA,siRNA),并分别转染体外建立的炎性损伤模型,通过检测其蛋白表达水平的变化检测载体是否转染成功,并检测培养上清中白介素-6(interleukin-6,IL-6)水平的变化,来验证11β-HSD1在炎症调控中的作用,从而探讨GC治疗不敏感的可能原因。结果:1.GC能改善部分ARDS患者的氧合状况,但部分患者对GC治疗效果不明显。2、LPS浓度1ug/ml,刺激人脐静脉血管内皮细胞48h为内皮细胞炎性损伤模型。3、成功构建了11β-HSD1-pc DNA3.1myc/his真核表达载体,并在HUVEC细胞中成功表达。成功筛选到了干涉11β-HSD1的有效siRNA片段,并在HUVEC细胞中成功干涉了11β-HSD1。4、在细胞炎症损伤状态下,增加11β-HSD1表达水平,细胞分泌IL-6降低。抑制11β-HSD1表达水平,细胞分泌IL-6升高。结论:在细胞炎症损伤状态下,改变11β-HSD1表达水平,会相应表现出炎症的增强或减弱,提示我们11β-HSD1基因的表达可能在糖皮质激素治疗中发挥重要作用,为糖皮质激素治疗研究提供新的靶点。