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分离和筛选动物肠道芽孢杆菌,精准开发特异性的肠道益生菌,能够更有效促进肠道认知,使其在动物肠道环境中迅速生长和形成菌落,维护肠道微生物区系与宿主平衡,大大提高饲料利用率,具有显著的经济和生态效益。本研究从野生大黄鱼肠道中分离、鉴定了一株芽孢杆菌,并对其培养条件和培养基进行了优化,最后,探讨了以不同食用菌菌糠为发酵底物的发酵培养肠道芽孢杆菌的可行性。具体研究结果如下:本文采用肠液梯度稀释法,从健康的大黄鱼肠道中,首先分离出一株芽孢杆菌LYC-1;结合菌落及显微形态和基于16SrDNA的序列分析对其进行鉴定;利用水解圈的方法对该菌株产蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶及超氧化物歧化酶(SOD)的定性分析;探讨了该菌株对人工肠、胃液耐受性和渗透压耐受性。结果显示:该菌株与Bacillu(属)簇集在一起,结合形态特征,确认LYC-1属于芽孢杆菌属。产酶分析显示,该菌株具有蛋白酶、淀粉酶及SOD的分泌能力。而且,能够耐受肠胃液及高浓度的渗透压。采用单因素试验研究了适合LYC-1产蛋白酶的碳氮源、无机盐和发酵条件。用Placke-Burman试验设计、.最陡爬坡试验及响应面中的Box-Behnken法确定液体发酵的条件和培养基,进行了验证;并在25 L发酵罐中进行放大培养。结果显示:该菌的适宜培养基及发酵条件为:葡萄糖2.0%、蛋白胨1.8%、KH2PO40.2%、MgSO40.05%、Cacl20.02%,pH8.8、温度25 ℃、转速180r/min、装液量20mL;验证实验得到蛋白酶活为(418.62±0.74)U/mL,比原培养提高了 1.92倍;而且发酵罐放大培养的蛋白酶酶活最高达到693.51 U/mL,是摇瓶发酵的1.57倍,是优化前的3.18倍。采用固体发酵研究了金针菇、猴头菇、杏鲍菇菌糠作为培养料的芽孢杆菌发酵特性。探讨不同菌糠配比的共7种培养基的产芽孢数;采用单因素试验分析碳源、氮源、无机盐的添加量;设计5因素4水平的正交实验。结果显示:金针菇菌糠是最适的发酵底物;其正交优化的最适配方为:玉米粉3%、豆粕粉3%、麸皮4%、KH2PO40.2%、CaCO30.2%。芽孢数可达7.32×109cfu/g。