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第一部分长链非编码RNA芯片筛选及筛选基因的表达验证目的:应用微阵列芯片技术检测宫颈癌组织中长链非编码RNA的表达谱,通过观察长链非编码RNA在宫颈癌及癌旁组织中的表达差异。方法:1.应用微阵列芯片技术检测宫颈癌与癌旁组织中长链非编码RNA的表达谱。2.通过Realtime-PCR检测筛选分子对表达谱芯片结果进行验证;3.根据表达差异,选择相应候选分子开展后续研究。结果:1.长链非编码RNA表达谱芯片分析显示,宫颈癌与癌旁组织相中长链非编码RNA表达谱存在显著差异。结果显示表达差异有4倍以上的长链非编码RNA有47条,其中上调的有26条,下调的有21条。(P<0.05);2.通过UCSC数据库分析统计,Real-time-PCR检测验证筛选芯片结果中表达上调的8条Lnc RNA在宫颈癌及癌旁组织中表达水平,验证结果分析与芯片结果相一致;3.Real-time-PCR检测结果显示筛选验证Lnc RNA中UCA1在宫颈癌组织中明显高表达,结合UCA1与细胞凋亡关系密切,选取UCA1作为候选分子开展后续研究。第二部分宫颈癌组织中Lnc RNA UCA1的表达差异及临床意义目的:探讨在宫颈癌组织中Lnc RNA UCA1的表达差异及临床相关性;方法:1.利用PCR技术检测Lnc RNA UCA1在宫颈癌各组织中的表达;2.结合临床信息分析患者宫颈癌组织中UCA1表达差异与FIGO分期,病理分型,肿瘤浸润程度相关性。结果:1.q PCR检测宫颈癌组织中lnc RNA UCA1的相对表达量分别为:宫颈癌组:28.4±7.8;癌旁组:10.9±3.8;非瘤变组:4.2±2.3;宫颈CIN组:12.2±16.9。UCA1的表达在宫颈癌组织中高于宫颈癌旁组及宫颈非瘤变组的表达(p<0.05);2.UCA1的表达与肿瘤病理类型,FIGO分期,肿瘤浸润深度显著正相关(p<0.01)。第三部分探讨长链非编码RNA UCA1在宫颈癌顺铂化疗耐受中的作用及相关的机制目的:探讨长链非编码RNA UCA1对宫颈癌细胞顺铂耐药的影响,初步分析其相关的分子机制。方法:1.通过被动增加顺铂剂量刺激建立顺铂耐受He La细胞株He La/DDP;2.利用Real-Time PCR检测宫颈癌He La细胞及顺铂耐药He La/DDP细胞中Lnc RNA UCA1的表达水平;3.通过构建pc DNA3.0-UCA1载体和UCA1si RNA,在宫颈癌He La细胞中分别进行UCA1基因过表达及基因沉默,采用CCK-8、Edu法及流式细胞术分析He La细胞的增殖活性;4.利用Westernblotting方法检测UCA1调节宫颈癌He La细胞株中细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、p21、survivin及CDK2表达水平。结果:1.PCR结果显示宫颈癌顺铂耐药He La/DDP细胞中UCA1表达明显上调;2.CCK-8、Edu法及流式细胞术的结果显示UCA1过表达在He La细胞中显著降低由顺铂引起的细胞凋亡;3.Western-blotting的结果显示UCA1过表达能够下调细胞凋亡相关蛋白Caspase-3及p21的水平,同时上调细胞周期蛋白survivin及CDK2的水平。对UCA1沉默后进一步验证了以上结果。结论:1.通过芯片筛查及Realtime-PCR验证长链非编码RNA UCA1在宫颈癌组织中高表达;2.长链非编码RNA UCA1在宫颈癌组织中高表达;结合临床资料分析UCA1表达量与宫颈癌患者FIGO分期及肿瘤浸润深度相关;3.长链非编码RNA UCA1促进顺铂耐药的作用可能是通过下调Caspase-3,p21的水平,同时上调survivin及CDK2细胞凋亡相关蛋白实现的。