湖羊FSHβ/FSHR基因与卵巢发育关系及其多态性的研究

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湖羊是世界上著名的多羔绵羊品种,具有性成熟早、四季发情和多胎多羔的繁殖特性。卵泡刺激素(Follicular stimulating hormone,FSH)是促进卵泡发育的重要激素,通过卵泡刺激素受体(Follicle stimulating hormone receptor,FSHR)介导的腺苷酸环化酶-环磷酸腺苷(cAMP)途径发挥生理作用。本研究以初生至6月龄7个阶段各3头母羊作为研究材料。测定各月龄母羊的体重体尺、卵巢重量及尺寸、子宫重量。对各月龄母羊的卵巢组织进行石蜡包埋和切片,HE染色,在正置显微镜下观察卵巢组织结构,统计各月龄卵泡总数、腔前卵泡数及有腔卵泡数。用免疫组化检测卵巢中FSHβ和FSHR的分布情况。用荧光定量PCR检测各月龄卵巢和垂体中FSHβ和FSHR的表达量。根据母羊的产羔记录挑选出位于正态分布两尾的个体,作为高繁组和低繁组,用PCR扩增和测序检测FSHβ和FSHR基因在湖羊中的单核苷酸多态性(SNP)。计算FSHβ和FSHR基因各SNPs的等位基因频率和基因型频率,分别比较它们在两组间的差异。构建单倍型,用卡方检验计算单倍型在两组间的差异。旨在研究FSHβ和FSHR基因与湖羊卵巢发育的关系、FSHβ/FSHR基因多态性对湖羊产羔数的影响,为提高湖羊繁育能力和标记辅助选择提供理论依据。研究结果如下:1.湖羊从初生到6月龄期间,2月龄的体重体尺、卵巢的重量和尺寸增长最快,且2月龄开始出现大量的有腔卵泡。2.卵泡中的卵母细胞、颗粒细胞和透明带均有FSHβ分布,FSHβmRNA在各月龄卵巢和垂体中均有表达。初生和1月龄卵巢FSHβ表达量较其它月龄的表达量高,但差异不显著(p>0.05)。在垂体中,初生时FSHβ表达量较其它月龄的表达量低,差异不显著(p>0.05)。3.卵泡中的卵母细胞和颗粒细胞有FSHR的分布,但透明带没有FSHR。FSHR mRNA在各月龄的卵巢和垂体中均有表达,但垂体中表达量低,在4、5和6月龄时表达量较初生时分别增加了30%、173%和192%。卵巢中FSHR的表达量是从2月龄开始迅速增加,在4月龄达到最高。4.FSHR基因的g.40 G>C、g.78 T>C、g.99 G>T、g.101 A>G处SNPs在高繁组和低繁组中的基因型频率差异显著(p<0.05),其中g.78 T>C,g.99 G>T和g.101 A>G这3个位点位于同一连锁区块,其形成的单倍型在高繁和低繁组中差异同样显著(p<0.05),推测该单倍型与高繁性状相关。本研究发现从1月到2月龄是湖羊母羊机体的快速发育阶段,在该阶段湖羊的体重体尺及卵巢的重量和尺寸迅速增加,在2月龄时卵巢开始大量出现有腔卵泡。FSHβ在卵巢中表达,且原始卵泡中有FSHR的存在。FSHR基因中g.78 T>C、g.99G>T和g.101 A>G这三个位点的单倍型可能与高繁性状相关。综上所述,FSH和FHSR基因参与湖羊从出生到性成熟期间卵巢发育的调控,FSHR基因的多态性可能影响湖羊的产羔数。
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