二硫键A氧化还原类似蛋白(DsbA-L)是新被鉴定的帮助脂联素的折叠和分泌的分子伴侣蛋白。脂联素是一种有益的脂肪因子。在肥胖人体中,DsbA-L水平下降,伴随着血清中脂联素水平的下调,特别是多聚体脂联素形式。在啮齿动物和人体研究中,核受体过氧化物激酶受体PPARy的激动剂可以通过激活PPARy,上调内质网相关蛋白的水平,形成一个高效的蛋白折叠环境,从而增加血清中脂联素的循环量。此外,DsbA-L作为一个新的PDI家族的成员之一,他独特的促进脂联素分泌的机制仍未知。本实验采用双荧光素酶报告系统,细胞转染,基因敲减,实时定量PCR,蛋白质免疫共沉淀技术,染色质免疫共沉淀,通过PPARy对脂联素多聚体形式的促进作用,分析PPARy对DsbA-L的作用,进而研究DsbA-L在PPARy调控脂联素多聚体形式向胞外分泌中的重要作用。结果如下,1.基因转染,蛋白质免疫印迹分析PPARy促进胞外脂联素多聚体水平,利用基因表达,基因敲减,实时定量PCR及蛋白质免疫印迹技术验证PPARy上调脂联素及脂联素折叠分泌相关分子伴侣蛋白。2.生物信息学分析DsbA-L启动子存在PPRE,利用基因共转染,双荧光素梅报告系统,启动子突变截断,及染色质免疫共沉淀证实PPRE结合到DsbA-L启动子上促进DsbA-L的表达。3.基因敲减,通过蛋白质免疫印迹分析成熟分化的脂肪细胞中,DsbA-L及PPARy水平降低会下调胞外多聚体脂联素的水平。基因转染分析验证DsbA-L对胞外脂联素多聚体形式的促进作用。