论文部分内容阅读
芦竹根为禾本科植物芦竹(Arundo donax L.)的新鲜或干燥根茎。具有清热泻火、止呕生津的功效,临床上主要用于治疗小儿上呼吸道感染引起的高热症,疗效确切。为中药制剂芦黄冲剂和去感热注射液的主要原料药材。有文献报道芦竹根含有N,N-二甲基色胺,蟾毒色胺和蟾蜍特尼定等生物碱成分,我国产芦竹根的化学成分未见文献报道。在本实验室已经从该药材中分离得到一种新型双吲哚生物碱芦竹辛(donasine)的基础上,对国产芦竹根中的其它生物碱成分进行了进一步的研究。采用硅胶柱层析法,以二氯甲烷-甲醇-氨水系统进行洗脱,从芦竹根水煮醇沉氯仿萃取的浸膏中分离得到一种纯度达99.9%的单体。通过高分辨质谱得到该单体的分子式为C23H28N4O,分子量为376.49,并用多种光谱分析手段,包括紫外光谱,红外光谱,一维,二维核磁共振谱等协同鉴定了其结构。经文献检索,证实该单体为一种双吲哚生物碱,名为arundamine(芦竹胺)。芦竹胺为首次从我国产芦竹根中分离得到。为考察该化合物是否能为芦竹根作用的物质基础提供依据,我们进行了相关药效学实验。结果表明,芦竹胺在0.5 h内对2,4-二硝基酚所致发热大鼠有显著的解热作用,在1 h~6 h内对角叉菜致炎大鼠足跖肿胀有较显著的消炎作用。为进一步研究芦竹胺在各地芦竹根药材和制剂中的含量,本课题建立了同时测定药材和制剂中芦竹胺含量的RP-HPLC方法,并用于其在各地芦竹根药材和制剂去感热注射液中含量研究。实验中深入研究了芦竹根药材的预处理方法,考察了提取溶剂种类、是否碱化或酸化提取、浸泡时间、提取时间等。在此基础上,建立了芦竹根药材的预处理方法,即加甲醇和氨水浸泡12 h(过夜),超声15 min,放至室温,滤过,药渣用提取溶剂30 ml洗涤,并入滤液中,50℃挥干,分别加乙醇-水-冰醋酸(50:50:1)混合溶剂溶解,完全转移至25 ml容量瓶中,定容,滤过,取续滤液进样分析。对于芦竹根制剂中芦竹胺的含量测定,主要考察了去感热注射液,样品预处理方法确定为直接进样。色谱条件的研究最后确定色谱条件为:Eclipse C8(4.6×150 mm,5μm):流动相:乙腈-30 mmol/L磷酸二氢钾溶液(磷酸调pH=3.0)(43:57),SDS 3.5 mmol/L:柱温:35℃;流速:1.0 ml/min;检测波长:280 nm;进样量:10μl。在此色谱条件下,芦竹胺峰与前后组分峰分离良好,各组分间分离度符合要求。采用上述预处理方法和色谱条件对芦竹根药材和去感热注射液样品中芦竹胺进行了测定,并对分析方法(线性、回收率、日内及日间精密度、专属性)进行了系统验证,表明该方法专属、准确、精密度较高。应用建立的分析方法研究了7个不同产地芦竹根药材和5个不同批号去感热注射液中芦竹胺的含量。此外,对芦竹根及其混淆品芦根从化学成分的角度利用HPLC进行了鉴别,结果表明两者的化学成分相差显著。本课题进一步丰富了国内对芦竹根药材的研究,为去感热注射液质量标准的提高提供了另一个指标性成分,也为其临床安全、合理、有效的应用提供了依据:国内芦竹根中双吲哚生物碱芦竹胺的首次发现和药效学考察,为芦竹根中其它组分的研究奠定了一定基础。