论文部分内容阅读
核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)是一种具有危害性的农业病原菌,每年都会在全球范围内造成巨大的经济损失。核盘菌的菌核和侵染垫结构在其长期存活以及成功侵染广泛的宿主中扮演着至关重要的角色。促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)级联在菌核发育和致病侵染等方面充当着核心信号传导复合物的重要作用。本研究对核盘菌MAPK级联中假定的下游转录因子Ss Ste12进行了分析。首先从核盘菌c DNA中克隆得到Ss Ste12基因编码序列,全长2085bp,含有STE和Zf-C2H2两个保守结构域。设计了两个沉默靶点p SD2 Target和p SD3Target,成功构建得到沉默载体p SD2-Ss Ste12和p SD3-Ss Ste12。利用PEG-Ga Cl2介导的核盘菌原生质体转化得到沉默转化子,经过鉴定筛选得到8个阳性Ss Ste12RNAi突变体菌株p SD2-1、p SD2-4、p SD2-11、p SD2-12、p SD3-1、p SD3-4、p SD3-7和p SD3-8作为后续研究。为了阐述Ss Ste12基因的功能,对8个Ss Ste12 RNAi突变体菌株和野生型核盘菌UF-1进行了以下研究:(1)菌落形态和生长速率对比分析;(2)菌核形成数量和菌核干重对比分析;(3)显微观察菌丝形态和侵染垫的形成情况;(4)全叶法、半叶法和伤口侵染实验观察RNAi突变体和UF-1侵染离体植物宿主时的致病力。结果表明Ss Ste12 RNAi突变体导致了菌丝营养生长变缓慢、菌核个体变小以及形成较少的附着胞,因此,Ss Ste12 RNAi突变体也减弱了侵染宿主植物的致病力。酵母双杂交(Y2H)检测和双分子荧光互补实验(Bi FC)验证了Ss Ste12和Ss MCM1转录因子在细胞核中存在相互作用,但是q RT-PCR实验表明Ss Ste12RNAi突变体中Ss MCM1的表达与Ss Ste12无关。结合在核盘菌早期发育过程中伴随着高Ss Ste12基因转录物的积累,我们的结果表明Ss Ste12作为MAPK的下游转录因子在菌丝生长、菌核发育和附着胞形成中扮演着调控作用,而Ss STE12和Ss MCM1的相互作用可能在调控核盘菌编码这些性状的基因中发挥重要作用。