缺血性心脏病及其引起的心肌梗死和充血性心力衰竭是疾病死亡的首要原因。绝经前女性缺血性心脏病的发病率明显低于男性,绝经后女性发病率迅速上升,甚至与男性相同,提示女性性激素,如雌激素对心血管具有有益的作用,流行病学证据、动物以及体外实验也支持雌激素具有心血管保护作用。基础研究显示雌激素在生物的发育、生长以及分化中具有重要作用,能够通过调控多种信号通路影响细胞的增殖及凋亡,其中包括转化生长因子β（Transforming growth factor-β,TGF-β）信号转导通路。关于二者对肿瘤细胞的相互影响及调控机制研究较多,但对于二者对心肌细胞影响研究较少。氧化应激是多种心脏疾病引起心肌肥厚、凋亡以及重构共同的病理生理机制,目前已有研究发现雌激素具有一定的抗氧化作用。本研究以来源于大鼠胚胎心肌细胞的H9c2细胞为模型,观察雌激素对过氧化氢诱导的心肌细胞氧化应激和凋亡的影响,及其对TGF-β信号通路的作用,探讨雌激素调控心肌细胞凋亡的机制及其生物学意义。目的:观察雌二醇（Estradiol,E₂）对过氧化氢诱导的心肌细胞氧化应激和凋亡的影响,及对TGF-β1信号通路的作用,探讨雌激素调控心肌细胞凋亡的机制及其生物学意义。方法:以大鼠胚胎心肌细胞系H9c2细胞作为细胞模型,1)采用MTT法以及流式细胞仪检测法,以过氧化氢作（H₂O₂）为外源性氧化应激刺激,观察其对H9c2细胞活性和凋亡、细胞内活性氧（ROS）水平的影响,以及E2对心肌细胞的保护作用;RT-PCR法检测H9c2细胞中雌激素受体α（ERα）和雌激素受体β（ERβ）mRNA的表达情况;2)Realtime RT-PCR以及Western blot法检测E₂对H9c2细胞TGF-β1,转化生长因子βⅠ型受体（TβRⅠ）以及转化生长因子βⅡ型受体（TβRⅡ）mRNA以及蛋白表达的影响,Western blot检测E₂对TβR受体后磷酸化smad2/3水平的影响。结果:1)MTT分析显示外源性H₂O₂呈浓度依赖性诱导H9c2细胞活性下降（P＜0.05）,选择100μM H₂O₂处理4小时作为后续试验的诱导条件;单纯应用不同浓度E2（50-200nM）处理H9c2细胞对其活性均无明显影响（P＞0.05）;应用200nM E2预处理H9c2细胞24小时可明显减轻H₂O₂对H9c2细胞活性的损伤（P＜0.05）,时相效应分析显示保护作用16小时达高峰可持续至24小时;应用不同浓度E₂（50-200nM）预处理24小时,E₂呈浓度依赖性抑制H₂O₂对H9c2细胞活性的损伤;依此结果选择200nM E2预处理24小时作为后续实验的干预条件。2)应用流式细胞仪检测H₂O₂诱导的H9c2细胞凋亡、ROS生成及E2的干预作用,结果显示,外源性H₂O₂可引起H9c2细胞凋亡及ROS生成明显增加,与对照组比较差异明显（P＜0.05）;E₂预处理能够明显减轻H₂O₂诱导的H9c2细胞凋亡,差异具有显著性（P＜0.05）。3)RT-PCR鉴定H9c2细胞ERα和ERβ的表达情况,发现H9c2细胞仅表达ERβ,几乎不表达ERα,推测E2对H9c2细胞的抗凋亡保护作用可能是通过ERβ介导。4)Realtime RT-PCR以及Western blot检测结果显示应用200nM E2处理H9c2细胞8小时后可下调TβRⅠ以及TβRⅡmRNA的表达,处理16小时后下调TβRⅠ以及TβRⅡ蛋白表达,但是对于TGF-β1mRNA及蛋白表达均无明显影响,给予ER阻断剂ICI 182,780阻断E₂与ER的结合,能够消除E2对TβRI及TβRⅡmRNA的下调作用。5)Western blot检测p-smad2/3蛋白水平显示,E2处理16小时后p-smad2/3蛋白水平降低。结论:1)外源性H₂O₂引起氧化应激能够引起细胞内ROS增加,损伤H9c2细胞活性,增加H9c2细胞的凋亡。外源性E2本身并不能影响H9c2细胞凋亡,但能够降低H9c2细胞对H₂O₂的敏感性,保护细胞抵抗氧化应激引起的凋亡。2)外源性E2对H9c2细胞的TβRⅠ以及TβRⅡ具有下调作用,阻断ER可消除E2对TβRⅠ和TβRⅡ的下调作用;E2可进一步通过TGF-β通路降低受体后磷酸化smad2/3的水平;H9c2细胞仅表达ERβ,提示E2可能是通过ERβ发挥其对TGF-β通路的调控作用。