论文部分内容阅读
猪肉作为人们日常广泛食用的动物源性食品之一,年消费比重占世界肉食摄入的36%。然而,近年来在我国动物源性食品监测中仍偶有违禁添加物β-受体激动剂的检出。目前文献及国家标准中对于β-受体激动剂的检测多采用酶水解法结合固相萃取小柱,操作较为繁琐、耗时长,难于实现短时间内对大量样品快速定量和检测。为此,本论文首先采用液相色谱-串联质谱/高分辨质谱,结合脂质组学考察样品提取优化过程中各类脂质的含量及比例动态变化,结合传统的前处理优化方法,在降低脂质含量的同时保证较高的回收率与较低的基质效应,并以此为基础建立猪肉中26种β-受体激动的快速定量分析方法,最后,进行系统的方法评价与实际样品的应用,具体研究结果如下:首先,利用脂质组学的研究方法考察不同体积比乙腈/水、正己烷除脂方式、吸附剂组合的猪肉样品提取溶液中脂质种类和含量的动态变化及其对基质效应的影响。提取溶液的结果表明,除乙腈/水=100/0和乙腈/水=90/10外,其余各组提取溶液中脂质含量均具有明显差异,且各提取溶液中磷脂含量最高。水比例的增大使提取溶液中磷脂含量（主要是磷脂酰胆碱（PC））逐渐增大,同时降低基质效应。磷脂（尤其是PC脂质）的增加会导致离子抑制作用的增加;正己烷除脂结果表明,使用不同除脂方式除脂后的提取溶液中脂质含量具显著差异。同时,正己烷可以降低提取溶液中的磷脂含量并降低基质效应;净化吸附剂组合结果表明,经不同净化组合处理后的提取溶液中脂质含量具显著差异。PSA能够降低提取溶液中的磷脂含量;C18的除脂效果更为明显且对磷脂酰乙醇胺（PE）、磷脂酰肌醇（PI）和磷脂酰丝氨酸（PS）的去除效率大于PC,同时降低基质效应。因此,在一定程度上磷脂含量的降低有利于降低基质效应。其次,通过在β-受体激动剂标准溶液中添加一系列不同浓度的甘油三酯和磷脂标准品,考察离子抑制率与脂质浓度之间的关系。结果表明,随着甘油三酯浓度（0～25 mg/L）的增加,奥西那林、沙丁胺醇、溴氯布特罗和沙美特罗的离子抑制率与其呈现出较强的（R2>0.7498）线性关系;随着磷脂浓度（0～100 mg/L）的增加,沙美特罗和喷布特罗的离子抑制率与其呈现出较强的（R2>0.8120）线性关系,而其它β-受体激动剂的离子抑制率也随着脂质浓度的增加,呈有不同程度的非线性增加趋势。基于脂质组学研究结果与基质效应、回收率的综合考察结果,对猪肉中β-受体激动剂的前处理方法进行优化。采用含沙丁胺醇的阳性样品将酶解温度升高至55℃同时缩短酶解时间至6小时,减少酶的用量为50μL并达到良好的酶解效果,提高酶解效率。通过优化不同的净化吸附剂组合,最终确定选择多功能针式过滤器MFF 3202（150mg MgSO4,50mg PSA,50mg C18）对样品进行―一步法‖净化,样品前处理时间（包括酶解过程）比传统方法缩短了三分之二,建立了猪肉中β-受体激动剂的快速定量分析方法,回收率在71.2%-118.61%之间,相对标准偏差均小于18.37%。方法的检出限和定量限分别在0.01μg/kg-0.10μg/kg和0.1μg/kg-0.5μg/kg之间。决定限度（CCα）和检测容量（CCβ）分别在2.47–19.08μg/kg and 4.44–37.97μg/kg的范围内。在国家畜禽产品质量安全风险监测项目的实际应用结果表明,方法效率高并具有良好的准确性和灵敏度,满足实际检测需求。