【摘 要】
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实验主要包括活性蛋白提制鉴定和体外马达蛋白运动测定.方法涉及免疫荧光标记、免疫印迹和蛋白质电泳,如SDS-PAGE变性电泳、活性蛋白电泳、梯度凝胶电泳和制备电泳.免疫荧光
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实验主要包括活性蛋白提制鉴定和体外马达蛋白运动测定.方法涉及免疫荧光标记、免疫印迹和蛋白质电泳,如SDS-PAGE变性电泳、活性蛋白电泳、梯度凝胶电泳和制备电泳.免疫荧光标记和免疫印迹用于鉴定活性肌动蛋白和丽藻细胞胞质中的肌球蛋白.Actin由于其同源性强、含量低、直接从植物中纯化难的原因,故从鸡骨骼肌中制备.活性肌球蛋白的鉴定和粗样制备使用丽藻细胞,采用了免疫印迹、免疫吸附、活染和荧光小球运动测试等方法.为进行微景肌球蛋白功能研究,根据其特性从丽藻原粗液中,用覆盖特异识别肌球蛋白尾部的抗体的荧光小球免疫吸附得到.然后加到肌动蛋白丝上观测运动情况.另外,胞质环流能被细胞松弛素B、氯丙嗪和氯四环素抑制.结论如下,第一,经典的肌动蛋白"聚合—解聚"循环法,能够纯化得到毫克级活性的动物肌动蛋白,分子量约200KD,达到电泳级纯度.该法具有简便易行、易操作的特点;第二,蛋白电泳和免疫印迹方法,鉴定出丽藻中微量的马达蛋白分子——肌球蛋白,分子量为460KD,活性染色证明样品液中肌球蛋白保持了酶活;第三,收缩蛋白Actin和Myosin与丽藻细胞胞质环流相关,Myosin是作为胞质环流动力的马达蛋白;第四,Myosin由重链和轻链组成,分子量分别为200KD和18KD左右;第五,运用免疫吸附的方法,收缩蛋白Actin和Myosin相互运动可测速率为2.O±0.1μm/s.
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