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目的:富半胱氨酸蛋白61(Cysteine rich 61,Cyr61)是CCN(Cyr61、CTGF、NOV)蛋白家族成员之一,为即刻早期基因,是重要的细胞基质调节因子。Cyr61具有明显的促有丝分裂活性和趋化性,参与调节细胞的增殖、转移、粘附,并和血管形成相关。Cyr61在肿瘤中表现的生物学功能是多样的,在不同的肿瘤组织细胞中,Cyr61的表达水平和功能不同。但是目前,Cyr61与肿瘤的确切关系及其机理尚不清楚。本研究首先分析了Cyr61在肝细胞癌(Human Hepatocellular Carcinoma,HCC)、癌周肝硬化、癌旁、正常肝脏组织中的表达,并同时分析了VEGF在HCC、癌周肝硬化组织中表达及其与Cyr61的相关性,探讨Cyr61在肝癌发生过程中的作用,进而以肝癌细胞株HepG2为模型,研究过表达外源性Cyr61对肿瘤细胞生长和迁移的影响,为进一步揭示Cyr61在肝癌发生中的作用和机制奠定基础,对寻找肿瘤诊断与治疗的新标志物和治疗靶点具有重要意义。方法:1.采用免疫组化SP染色法检测5例正常成年人肝脏组织和35例HCC患者组织中Cyr61蛋白表达水平,半定量分析其表达与HCC的临床病理学特征的关系。2.采用Western blot的方法定量分析正常成人肝脏组织、HCC患者组织及与其配对的癌旁组织中Cyr61蛋白表达的差异。3.采用RT-PCR的方法检测30例患者HCC组织及与其配对的癌旁组织中Cyr61的表达,半定量分析HCC组织和癌旁组织Cyr61 mRNA表达量的差异。4.采用免疫组化SP法,共检测58例HCC及癌周肝硬化组织中Cyr61和VEGF蛋白的表达,半定量分析28例HCC患者组织中Cyr61和VEGF蛋白表达与临床病理特征的关系,并分析Cyr61蛋白与VEGF蛋白表达在HCC发生过程中的相关性及对HCC血管生成的作用。5.应用293细胞扩增重组腺病毒Ad-Cyr61、Ad-RFP,并进行滴度测定及细胞感染,获得瞬时高表达Cyr61的Cyr61-HepG2细胞和对照细胞RFP-HepG2。6. RT-PCR、免疫组化SP染色法和Western blot分别检测Cyr61-HepG2细胞,RFP -HepG2细胞和HepG2细胞中Cyr61的mRNA和蛋白的表达。7. MTT实验、细胞计数实验、结晶紫染色实验、克隆形成实验和划痕愈合实验,观察Cyr61对人肝癌细胞株HepG2细胞增殖和迁移的影响。结果:1.高分化HCC组织的Cyr61蛋白表达水平高于低分化HCC组织(P < 0.01);镜下存在静脉浸润、多结节的HCC组织中Cyr61蛋白表达高于无静脉浸润、单结节的HCC组织(P < 0.05)。2.正常成人肝组织未见Cyr61蛋白的表达,癌旁肝组织Cyr61蛋白的表达明显高于相应HCC组织(P<0.05)。3. 30例肝癌组织Cyr61 mRNA表达均为阳性, HCC组织Cyr61 mRNA表达低于相应癌旁组织(P < 0.05)。正常成人肝组织Cyr61 mRNA表达和癌组织的表达量无差异,低于癌旁组织Cyr61mRNA的表达量(P<0.05)。4. Cyr61、VEGF在癌周肝硬化组织中的表达均高于HCC,差异有统计学意义(P<0.01);Cyr61、VEGF蛋白的表达均与肿瘤的转移密切相关(P<0.05);相关性检验结果显示Cyr61和VEGF在HCC组织、癌周肝硬化组织中有相关性(r=0.444,P<0.01)。5. Ad-Cyr61感染人肝癌细胞株HepG2,与对照组比较细胞数量增多,集落形成增加,细胞划痕逐渐愈合。结论:1. Cyr61在HCC及其癌周组织的蛋白和mRNA的表达及和临床病理特征参数之间的关系,提示Cyr61可能在肝癌的发生早期发挥重要作用,并与肝癌进程中的间质重建和侵袭转移有关。2. Cyr61和VEGF在HCC和癌周肝硬化组织中表达的高度相关性,提示Cyr61、VEGF异常表达与肝硬化肝癌的发展密切相关,在肝硬化向肝癌转化和肿瘤血管生成过程中发挥重要的作用,有望为肝癌的早期诊断提供较为客观的参考指标。3. Ad-Cyr61感染人肝癌细胞株HepG2后可促进细胞增殖和迁移,提示Cyr61在肿瘤发生和转移中可能起到重要作用。