基于抗氧化活性的厚朴有效组分的研究

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厚朴是中国传统中药,燥湿消痰,下气除满,用于湿滞伤中,脘痞吐泻,食积气滞,腹胀便秘,痰饮喘咳。近年来,很多研究都集中在厚朴中木脂素类化合物厚朴酚与和厚朴酚的生物活性,对厚朴中的微量元素、挥发油和多糖的关注较少,因此本论文对厚朴中的微量元素、挥发油、各相萃取物和多糖进行了研究。采用电感耦合等离子体发射光谱法(ICP-AES)对厚朴水煎液中人体所需的6种微量元素Fe、Mn、Zn、Cu、Cr和Ni的形态进行分析。原药中Fe、Cu、Zn和Mn的含量都比较高,其含量特征为Fe>Mn>Zn>Cu>Cr>Ni。在初级形态中,Ni的提取率最高。在次级形态中,微量元素在颗粒物中的浓度远大于在可溶态中,可溶态中各元素的含量分布为Fe>Mn>Zn>Cr>Cu>Ni。在可溶态中,微量元素只有少量以有机态结合,大多数都以无机态结合。Fe在水煎液中含量最高,Mn和Ni在水煎液中稳定螯合态在可溶态中所占比例分别为99.85%和94.38%。用水蒸气提取法提取厚朴中的挥发油,并用GC-MS对其化学成分进行研究。结果表明,其主要成分为β-桉叶醇、10-反式-γ-桉叶醇、2-异丙烯-4a,8-二甲基-1,2,3,4,4a,5,6,7-八氢萘、β-芹子烯和β-石竹烯。对厚朴挥发油进行活性研究,发现其挥发油具有-定的抗氧化和抗菌作用,而且抗菌研究发现厚朴挥发油对金黄色葡萄球菌具有较为明显的抗菌活性。通过抗氧化、抗菌和抗肿瘤活性实验发现,厚朴各相萃取物表现出不同的抗氧化、抗菌和抗肿瘤活性,并测量了各相萃取物中总多酚和总单宁含量。从抗肿瘤活性最高的萃取物中分离得到的主要成分厚朴酚与和厚朴酚表现出对KB、HepG 2和MCF-7肿瘤细胞生长的抑制作用。对厚朴多糖的研究首先通过响应面分析法考察了提取时间、提取温度和水料比等对多糖提取率的影响,得到了水提法的最佳提取工艺:提取温度是93.7℃;提取时间为3.25小时;水料比为26.2:1。再以脱色率、脱蛋白率和多糖保留率为指标,筛选出最适宜的大孔树脂对厚朴多糖进行脱色工艺研究。选用ADS-7大孔吸附树脂作为研究对象,通过正交试验研究大孔吸附树脂对多糖的脱色工艺,得到最佳工艺条件为:多糖浓度为0.2%;脱色温度为45℃;脱色时间为2小时。在此条件下,厚朴多糖的脱色率可达到最大,同时也可以去除大量的蛋白。在提取工艺和脱色工艺的基础上,通过分级沉淀法得到了三种厚朴多糖部分。这三种多糖部分的分子量分布范围分别是5600-9400 Da,4700-5400 Da,3900-4200 Da。通过对三种多糖部分的活性研究发现,分子量最小的多糖部分表现出更高的抗氧化活性和对肿瘤细胞生长更强的抑制作用,并对其进行分离纯化,初步研究表明,得到了一个均一多糖,其分子量为1052。
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