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白血病(leukemia)是临床常见恶性肿瘤之一，化疗是目前治疗白血病的主要手段。白血病细胞多药耐药性(multidrug resistance，MDR)的产生，是化疗失败的一个主要原因。高三尖杉酯碱(homoharringtoni ne，HHT)是我国自主研制成功的高效抗白血病药物，系从粗榧属植物的总生物碱中分离出的一种生物碱，是我国治疗急性髓系白血病(acute myeloid leukemia)的主要药物之一，MDR的产生极大的影响了HHT的化疗效果。目前化疗药物对白血病细胞产生MDR的机理尚未完全阐明，建立白血病多药耐药细胞系是研究白血病细胞MDR的机理及MDR逆转机制的必要条件。本文以红白血病细胞系K562为研究模型，在建立HHT诱导的多药耐药细胞株K562／HHT的基础上，初步研究了该细胞株的生物学特性、耐药机理及耐药逆转的机制。主要研究内容和主要结果如下：一、白血病多药耐药细胞株K562／HHT的建立及其生物学特性的研究采用反复短期暴露并逐渐增加HHT浓度的方法建立白血病多药耐药细胞株K562／HHT。MTT法检测此耐药细胞株对HHT的耐药倍数及其对几种临床常用化疗药物的交叉耐药性。结果显示K562／HHT细胞株较其亲代细胞K562对HHT、阿霉素、长春新碱、依托泊苷的耐药性分别提高462.6、2.8、1183.4和2.6倍。RT-PCR法检测细胞mdr1基因、葡萄糖神经酰胺合成酶(Glucosylceramide synthase，GCS)基因的表达，结果显示，mdr1基因在耐药细胞株K562／HHT中的表达较药物敏感细胞株K562的表达明显增高；GCS基因在耐药细胞株K562／HHT细胞表达，在药物敏感细胞株K562细胞未检测到其表达。应用流式细胞术检测细胞P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)的表达和细胞对柔红霉素外排能力的变化，结果显示K562／HHT细胞P-gp表达率明显高于K562细胞，其细胞内柔红霉素积累量明显低于K562细胞。应用免疫组化法检测细胞bcl-2、bax和caspase-3基因的表达，结果表明K562／HHT细胞bcl-2／bax比值明显高于K562细胞，caspase-3表达率明显低于K562细胞。K562／HHT细胞培养6个月后其耐药性无明显变化。因此，成功地建立了人白血病多药耐药细胞株K562／HHT，其耐药性的产生可能与P-gp、GCS和凋亡相关蛋白的表达变化有关，为进一步研究白血病细胞多药耐药的机制奠定了基础。二、孕酮拮抗剂米非司酮(mifepristone，RU486)对K562／HHT细胞耐药逆转作用的研究为研究孕酮拮抗剂米非司酮可否逆转K562／HHT细胞的多药耐药性，本文应用MTT法观察了不同浓度的RU486对K562／HHT细胞增殖的影响，以及RU486作用于K562／HHT细胞后细胞对多种化疗药物敏感性的变化，结果发现10μmol／L RU486对K562／HHT细胞无明显的杀伤作用，并能够有效的逆转K562／HHT细胞对HHT、阿霉素、长春新碱和依托泊苷的耐药性。应用流式细胞仪检测RU486作用前后K562／HHT细胞对化疗药物柔红霉素外排能力的变化，结果显示RU486作用后K562／HHT细胞内柔红霉素积累量明显高于作用前。应用免疫组化技术检测RU486作用前后K562／HHT细胞bcl-2、bax和caspase-3基因的表达，结果显示RU486作用后K562／HHT细胞bcl-2／bax比值明显低于作用前，caspase-3表达率明显高于作用前。表明RU486可通过促进细胞内化疗药物积累，调节凋亡相关蛋白的表达逆转K562／HHT细胞的多药耐药性。RU486有望成为一种有价值的耐药逆转剂。