在植物中,依赖于网格蛋白的膜运输与很多生物学过程密切相关,拟南芥基因组中有3个编码网格蛋白轻链蛋白亚基的基因(CLC1、CLC2和CLC3)和2个编码网格蛋白重链蛋白亚基的基因(CHC1和CHC2)。拟南芥clc2clc3双突变体植株叶片在自然生长条件下会发生细胞死亡现象。伴随细胞死亡,clc2clc3双突变体中病程相关基因被大量诱导表达、MPK3/4/6激酶被强烈激活。clc2clc3双突变体对Pst DC3000细菌的抗性较野生型Col-0也显著增强,但产生细胞死亡及防御反应激活的原因尚未明确。由于水杨酸及H2O2均有诱导细胞死亡的功能,因此我们将通过遗传学手段探究拟南芥clc2clc3双突变体植株发生细胞死亡现象是否与促细胞死亡因子有关。植物中与抗性相关的H2O2是由位于质膜上呼吸爆发氧化酶(Respiratory burst oxidase homologue,Rboh)又称NADPH氧化酶催化合成。拟南芥Rboh基因家族由10个成员组成,其中RbohD在产生防御相关活性氧的过程中起到至关重要的作用。异分支酸合成酶1(Isochorismate S ynthase 1,ICS1)负责合成90%以上病原物诱导的水杨酸合成。因此,我们分别创制了sid2clc2clc3和rbohDclc2clc3两种三突变体。结果发现,ICS1及RbohD突变均可拯救clc2clc3双突变体自发性细胞死亡及防御反应激活的现象。DAB染色结果表明,clc2clc3双突变体叶片中H2O2积累量显著高于Col-0,但三突变体中H2O2的积累量恢复到野生型。综上所述,我们的研究结果表明,clc2clc3双突变体植株中自发性细胞死亡及防御反应激活与水杨酸和过氧化氢的合成的失调密切相关。