论文部分内容阅读
缺血性脑卒中是临床常见的急危重症,缺血缺氧可以直接对脑组织造成损害,同时缺血再灌注可以增加血脑屏障的通透性使脑组织遭受二次打击以及持续性损伤。目前有许多关于神经保护药物的研究,其作用原理多与降低血脑屏障通透性相关,其中白蛋白是近期研究比较热门的一种,有部分基础研究表明白蛋白有明显减小脑组织缺血再灌注梗死灶,减轻脑水肿的作用;而近期的多项关于白蛋白在脑血管疾病中应用的大规模多中心临床研究结果发现白蛋白组的预后较生理盐水组差,死亡率较生理盐水组高。因此,我们觉得有必要再次通过实验来研究白蛋白对于脑组织缺血再灌注损伤的作用。目的:探讨人血白蛋白对缺血-再灌注(IR)大鼠的血脑屏障(Blood Brain Barrier,BBB)通透性的影响及其可能机制。材料与方法:采用右侧大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)法制作缺血再灌注大鼠模型,2h后拔出线栓再灌注为治疗起点,采用尾缘静脉注射法注射药物。选用健康雄性SD(Sprague Dawley)大鼠36只,按随机数字表法分为6组(n=6):假手术6h组、24h组(Sham组:分离出颈总动脉、颈内动脉以及颈外动脉然后缝合皮肤),生理盐水组6h组、24h组(NS组:生理盐水5ml/kg),白蛋白组6h组、24h组(Alb组:25%人血白蛋白1.25g/kg)。分别于治疗后用ELISA检测大鼠血清中S100B蛋白的浓度从而评估脑损伤的严重程度;通过分光光度法测量脑组织中伊文氏蓝(Evans blue)染料的含量;6 h,24 h进行大鼠神经功能缺陷评分;观察治疗后大鼠脑组织梗死体积、水肿体积以及rADC等MRI影像学变化,通过透射电镜观察血脑屏障相关超微结构的形态学变化:采用Westernblot法测定大鼠脑组织缺血半暗带ZO-1,Occludin以及AQP4蛋白的表达情况。采用SPSS17.0统计软件进行统计分析,数据采用单因素方差分析,用LSD法进行组间两两比较,如果方差不齐则用近似方差分析的Dunnett T3法进行比较。P<0.05为差异具有统计学意义。结果:在MCAO术后Alb组6h(196.67±20.11 vs.160.04±14.00,P=0.000)与24h(145.81±8.88vs.122.49±12.69,P=0.000)血清S100B的浓度明显高于NS组,差异有统计学意义;术后6h(0.97±0.08vs.0.74±0.06,P=0.000)以及24h(2.45±0.07 vs.2.23±0.07,P=0.000)脑组织中伊文氏蓝含量的检测Alb组高于NS组,差异具有统计学意义;NS组以及Alb组的神经功能缺陷评分明显高于Sham组(P=0.000);在6h,24h两个时间点,NS组与Alb组的差异无统计学意义(p=1.000)。接受治疗6h后NS组与Alb组大鼠头部核磁共振T2WI图像的梗死及水肿带占大脑总体积百分比(%HLA)的比较(25.69±1.19vs.28.51±0.47,P=0.433)以及接受治疗 24h 后(27.31±0.15vs.29.21±0.95,P=0.107),差异没有统计学意义;通过分析核磁共振DTI序列计算的患侧大脑与健侧大脑的 rADC 值得出,分别在 6h(0.83±0.05 vs 0.72±0.06,P =0.000)以及24h(0.67±0.07 0.58±0.01,P=0.001),差异均具有统计学意义;通过透射电镜观察大鼠血脑屏障超微结构的形态学变化,在治疗6h后NS组以及Alb组均出现星形胶质细胞水肿,内皮细胞胞质内细胞器肿胀,内皮细胞间紧密连接模糊,两组间形态学并无明显差异24h后星形胶质细胞出现空泡化,细胞器肿胀更加严重,紧密连接松散,组间形态学无明显差异。与NS组比较Alb组在治疗6h后大鼠大脑皮层缺血半暗带中ZO-1的蛋白表达无明显变化(P>0.05),24h后Alb组明显减少(P<0.05);治疗6h后Occludin蛋白在缺血区的表达NS组与Alb组比较没有明显差异(P>0.05),然而在24h后Alb组Occludin的表达明显低于NS组(P<0.05)。AQP4在治疗6h表达Alb组高于NS组(P<0.05),24h后Alb组表达同样高于NS组(P<0.05)。结论:人血白蛋白未发现有改善缺血再灌注大鼠神经功能以及减小大鼠因大脑缺血再灌注损伤引起梗死灶以及水肿体积,相反白蛋白可以增加缺血再灌注大鼠血脑屏障通透性,其作用机制可能与其下调紧密连接蛋白ZO-1、Occludin以及上调水通道蛋白AQP4的表达有关。