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目的深入观察氧化苦参碱(Oxymatrine,OMT)对新生大鼠缺血缺氧脑损伤的保护作用,并且阐明其可能作用机制。方法1.氧化苦参碱对新生大鼠缺血缺氧脑损伤的保护作用整体水平:七日龄新生大鼠麻醉后构建缺血缺氧脑损伤模型,随机分为假手术(Sham)组、模型(HI)组和OMT(120mg/kg)干预组。观察氧化苦参碱对新生大鼠缺血缺氧脑损伤的保护作用:(1)翻正反射、被动趋地反射和悬崖回避反射评价新生大鼠神经发育情况;(2)干湿重法检测脑含水量;(3)HE染色法观察脑组织神经元形态变化;(4)TUNEL染色观察脑组织神经元坏死程度;细胞水平:新生大鼠原代海马神经元氧糖剥夺2h,再灌注24h构建氧糖剥夺再灌注(OGD/R)损伤模型,随机分为正常(Control)组、模型(OGD/R)组以及OMT干预(5μg/m L)组。观察氧化苦参碱对新生大鼠原代海马神经元OGD/R损伤的保护作用:(1)采用MTT法测定细胞存活率;(2)化学发光法检测线粒体通透性转换孔(m PTP)的开放程度。2.氧化苦参碱对新生大鼠缺血缺氧脑损伤的保护作用机制整体水平:(1)透射电镜观察自噬体的形成;(2)TTC染色观察脑梗死体积;(3)Western blot法检测PI3K、Akt、m TOR蛋白的表达水平;细胞水平:(1)MDC染色法评价自噬体形成水平;(2)Western blot法检测PI3K/p-PI3K、Akt/p-Akt蛋白的表达水平;(3)免疫荧光定位p-m TOR;(4)q-PCR法检测Beclin1、LC3、P62 m RNA的含量。结果1.氧化苦参碱对新生大鼠缺血缺氧脑损伤的保护作用整体水平上,与Sham组比较,新生大鼠经历HIBD后神经行为学反射如翻正反射、被动趋地反射和悬崖回避反射的时间显著增加(P<0.01),脑含水量增加(P<0.01),神经元组织形态发生损伤,损伤死亡程度加重;给予120mg/kg OMT后,新生大鼠缺血缺氧损伤导致的早期神经反射的时间显著降低(P<0.01),脑含水量减少(P<0.05),组织病理损伤变化减轻,神经元损伤和死亡程度减轻。细胞水平上,相比Control组来说,新生大鼠原代海马神经元经历OGD/R损伤后存活率显著下降(P<0.01),细胞内m PTP开放程度显著增加(P<0.01)。OMT(5μg/m L)给药后,相比OGD/R组,神经元存活率增加(P<0.01),神经元内m PTP开放程度降低(P<0.01)。2.氧化苦参碱对新生大鼠缺血缺氧脑损伤的保护作用机制整体水平:与Sham组相比,HI组中脑组织自噬体形成水平、梗死体积显著增加(P<0.01),PI3K、Akt和m TOR蛋白在缺血脑组织内表达显著减少(P<0.01)。给予OMT干预后,梗死体积有了显著降低(P<0.01),自噬水平降低,PI3K、Akt和m TOR蛋白表达水平显著增加(P<0.01)。细胞水平:相比Control组来说,新生大鼠原代海马神经元经历OGD/R损伤后自噬水平增加,p-PI3K和p-Akt蛋白显著降低(P<0.01),p-m TOR荧光表达也显著降低(P<0.01),Beclin-1和LC3 m RNA表达水平增加而P62m RNA表达减少(P<0.01)。OMT给药后,相比OGD/R组,细胞自噬水平减少,p-PI3K和p-Akt蛋白表达水平以及p-m TOR荧光强度显著增加(P<0.01)。此外,OMT在减少Beclin-1和LC3 m RNA的表达(P<0.01,P<0.05)的同时增加了P62 m RNA的相对表达水平(P<0.01)。OMT对上述测量指标的调节作用能够被RAPA抵消。结论1.进一步确证氧化苦参碱对新生大鼠缺血缺氧脑损伤具有保护作用;2.氧化苦参碱对新生大鼠缺血缺氧脑损伤的保护作用与激活原代海马神经元的PI3K/Akt/m TOR信号通路、抑制过度自噬有关。