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目的：
在温和条件下构建一种低毒、高效、普适的多肽药物载体(HmA)，使其具备高效、普适的蛋白包载和胞内递送能力。针对多数蛋白类药物的眼部生物利用度低的情况，以贝伐单抗(Avastin)作为模型药物，制备HmA@Ava。通过增强Avastin的角膜穿透能力，来提高其在眼表的生物利用度，增强其抑制角膜新生血管的效果，以期将其应用于更多眼部蛋白药物的递送。
方法：
1.pH=8时，将硝酸锌与多肽(His6)混合生成多肽-金属组装体(His6-metal Assembly HmA)。运用多种手段(动态光散射DLS，扫描电镜SEM，透射电镜TEM等)系统表征了HmA的粒径、电位和颗粒形貌；通过红外光谱和拉曼光谱剖析HmA的生成原理；应用紫外和荧光光谱初步揭示HmA的载药原理，评估其载药能力和载药谱，并研究其在不同pH条件下的药物释放行为；并应用多种技术手段(激光扫描共聚焦显微镜LSCM，流式细胞仪FCM，酶标仪等)通过体外细胞实验评估了HmA的细胞毒性、细胞内吞效率以及内吞机制等。
2.在上述工作的基础上，将不同种类的蛋白质分子包裹进HmA纳米载体内(HmA@Protein)，运用多种技术手段(DLS，SEM，TEM，LSCM，FCM，酶标仪等)，对HmA@Protein的基本物理化学性质及其体外细胞实验进行表征。通过对比HmA@Protein与FreeProtein的细胞内吞情况以及入胞后的蛋白活性来评估HmA的胞内蛋白载送能力和活性保持。在与商业化蛋白载体(PULSin)的对比中，评估了HmA包裹抗体的胞内递送效率。并进一步评估了HmA对两种具有不同胞内靶向功能单克隆抗体的胞内递送，验证HmA的蛋白载送及维持蛋白功能特性。
3.合成HmA@Ava颗粒，并对其基本物理化学性质及体外细胞实验进行了表征。通过改良的德莱赛测试评估HmA在兔眼表面的生物相容性。建立大鼠碱烧伤角膜新生血管模型，比较不同用药时间后，生理盐水、HmA水溶液、FreeAva、HmA@Ava分别治疗后的大鼠角膜新生血管面积，评估HmA@Ava在治疗大鼠碱烧伤角膜新生血管中的作用。进一步通过大鼠角膜病理切片HE染色、免疫荧光法检测Avastin、VEGF-A以及CD31在角膜的分布情况等手段来深入评价大鼠角膜新生血管的治疗效果。
结果：
1.在温和条件下，快速高效地合成了HmA纳米颗粒。该颗粒具有窄分散的纳米级尺寸，表面电位约+10mV，较大的载药量，较广的载药谱。同时，具有较好的稳定性、pH值响应性、缓释功能、良好的生物相容性、高效细胞内吞、可绕过溶酶体等特性。
2.制备的HmA@Protein纳米颗粒具有窄分散的纳米级尺寸，正电性的表面电位，较高效、普适的蛋白包载能力。HmA@Protein能够显著提高各类蛋白质的胞内载送效率并保持载送蛋白的活性。抗体载送方面，在一定条件下，HmA的抗体载送效率优于商业化载体(PULSin)3~4倍，且HmA@Antibody能将胞内靶向的抗体载送进入活细胞内，并发挥作用。
3.制备并表征了HmA@Ava纳米颗粒，其具有与HmA@Protein相似的物理化学特性及较强的抗体包载能力。体外角膜上皮细胞吞噬实验以及大鼠角膜Avastin分布实验证明了HmA@Ava可以克服角膜生物屏障，高效地将Avastin载送进入角膜上皮细胞内部、角膜各层细胞以及浸润的炎症细胞内部。动物实验结果显示HmA具有良好的生物相容性，相对于FreeAva，HmA@Ava能够有效并持续地抑制大鼠角膜新生血管，即便是在停止给药后依然能够持续抑制大鼠角膜新生血管。
结论：
HmA易于合成，条件温和。该颗粒具有纳米级尺寸、较好的稳定性、较大的载药量、较广的载药谱、pH值响应性、缓释功能、良好的生物相容性以及高效的细胞内吞、能绕过溶酶体等特性，是较为理想的纳米载体。HmA在蛋白胞内载送方面展现出了明显的优势，尤其在抗体的胞内载送方面，HmA可高效地将抗体载送进入活细胞内并发挥作用。HmA能显著提高Avastin在眼表的生物利用度，从而增强Avastin抑制角膜新生血管的效果。以上研究表明HmA在眼部的蛋白药物递送中具有良好的应用前景。
在温和条件下构建一种低毒、高效、普适的多肽药物载体(HmA)，使其具备高效、普适的蛋白包载和胞内递送能力。针对多数蛋白类药物的眼部生物利用度低的情况，以贝伐单抗(Avastin)作为模型药物，制备HmA@Ava。通过增强Avastin的角膜穿透能力，来提高其在眼表的生物利用度，增强其抑制角膜新生血管的效果，以期将其应用于更多眼部蛋白药物的递送。
方法：
1.pH=8时，将硝酸锌与多肽(His6)混合生成多肽-金属组装体(His6-metal Assembly HmA)。运用多种手段(动态光散射DLS，扫描电镜SEM，透射电镜TEM等)系统表征了HmA的粒径、电位和颗粒形貌；通过红外光谱和拉曼光谱剖析HmA的生成原理；应用紫外和荧光光谱初步揭示HmA的载药原理，评估其载药能力和载药谱，并研究其在不同pH条件下的药物释放行为；并应用多种技术手段(激光扫描共聚焦显微镜LSCM，流式细胞仪FCM，酶标仪等)通过体外细胞实验评估了HmA的细胞毒性、细胞内吞效率以及内吞机制等。
2.在上述工作的基础上，将不同种类的蛋白质分子包裹进HmA纳米载体内(HmA@Protein)，运用多种技术手段(DLS，SEM，TEM，LSCM，FCM，酶标仪等)，对HmA@Protein的基本物理化学性质及其体外细胞实验进行表征。通过对比HmA@Protein与FreeProtein的细胞内吞情况以及入胞后的蛋白活性来评估HmA的胞内蛋白载送能力和活性保持。在与商业化蛋白载体(PULSin)的对比中，评估了HmA包裹抗体的胞内递送效率。并进一步评估了HmA对两种具有不同胞内靶向功能单克隆抗体的胞内递送，验证HmA的蛋白载送及维持蛋白功能特性。
3.合成HmA@Ava颗粒，并对其基本物理化学性质及体外细胞实验进行了表征。通过改良的德莱赛测试评估HmA在兔眼表面的生物相容性。建立大鼠碱烧伤角膜新生血管模型，比较不同用药时间后，生理盐水、HmA水溶液、FreeAva、HmA@Ava分别治疗后的大鼠角膜新生血管面积，评估HmA@Ava在治疗大鼠碱烧伤角膜新生血管中的作用。进一步通过大鼠角膜病理切片HE染色、免疫荧光法检测Avastin、VEGF-A以及CD31在角膜的分布情况等手段来深入评价大鼠角膜新生血管的治疗效果。
结果：
1.在温和条件下，快速高效地合成了HmA纳米颗粒。该颗粒具有窄分散的纳米级尺寸，表面电位约+10mV，较大的载药量，较广的载药谱。同时，具有较好的稳定性、pH值响应性、缓释功能、良好的生物相容性、高效细胞内吞、可绕过溶酶体等特性。
2.制备的HmA@Protein纳米颗粒具有窄分散的纳米级尺寸，正电性的表面电位，较高效、普适的蛋白包载能力。HmA@Protein能够显著提高各类蛋白质的胞内载送效率并保持载送蛋白的活性。抗体载送方面，在一定条件下，HmA的抗体载送效率优于商业化载体(PULSin)3~4倍，且HmA@Antibody能将胞内靶向的抗体载送进入活细胞内，并发挥作用。
3.制备并表征了HmA@Ava纳米颗粒，其具有与HmA@Protein相似的物理化学特性及较强的抗体包载能力。体外角膜上皮细胞吞噬实验以及大鼠角膜Avastin分布实验证明了HmA@Ava可以克服角膜生物屏障，高效地将Avastin载送进入角膜上皮细胞内部、角膜各层细胞以及浸润的炎症细胞内部。动物实验结果显示HmA具有良好的生物相容性，相对于FreeAva，HmA@Ava能够有效并持续地抑制大鼠角膜新生血管，即便是在停止给药后依然能够持续抑制大鼠角膜新生血管。
结论：
HmA易于合成，条件温和。该颗粒具有纳米级尺寸、较好的稳定性、较大的载药量、较广的载药谱、pH值响应性、缓释功能、良好的生物相容性以及高效的细胞内吞、能绕过溶酶体等特性，是较为理想的纳米载体。HmA在蛋白胞内载送方面展现出了明显的优势，尤其在抗体的胞内载送方面，HmA可高效地将抗体载送进入活细胞内并发挥作用。HmA能显著提高Avastin在眼表的生物利用度，从而增强Avastin抑制角膜新生血管的效果。以上研究表明HmA在眼部的蛋白药物递送中具有良好的应用前景。