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目的：通过体外培养单侧输尿管梗阻(unilateralureteralobstruction，UUO)病人肾间质成纤维细胞(humanRenalInterstitialfibroblasts，hRIFs)，观察其增殖规律和中药丹参主要成分丹参酮ⅡA的水溶性制剂—丹参酮ⅡA磺酸钠(sodiumtanshinoneⅡ-Asulfonate，DS-201)对hRIFs体外增殖及细胞周期素D1(CyclinD1)、细胞周期素E(CyclinE)表达的影响，探讨中药丹参成分对肾间质纤维化(Renalinterstitialfibrosis，RIF)的影响及其分子机制，为临床使用中药丹参治疗RIF提供理论和实验依据。
方法：1.单侧输尿管梗阻患者手术取材标本，采用组织块法体外培养细胞。用倒置相差显微镜观察细胞形态，并用免疫细胞化学(immunocytochemistry，ICC)和染色体核型分析方法对各代细胞进行鉴定。
2.取第3代对数生长期hRIFs用无血清1640培养基制成6×104/ml细胞悬液接种于96孔培养板，每孔细胞悬液量为100μl；培养18小时后更换培养基，开始实验。各实验组加入DS-201终浓度分别为0.5mg/ml、1.0mg/ml和2.0mg/ml含10％小牛血清(newbeefserum，NBS)的1640培养基200μl继续培养；同一药物浓度组设25个复孔，以不加药组为对照。于实验开始后的第1、3、5、7、9天每组各取5个复孔做MTT比色实验，用酶联免疫检测仪在波长490nm处检测吸光光度值(A)。按公式：抑制率(IR)=(1-实验组A值/对照组A值)×100％计算IR，并求其均值IRA。
3.ICC结合图像分析技术检测DS-201对hRIFs中PCNA表达的影响。
4.ICC结合图像分析技术检测①对照组hRIFs在培养第1、3、5、7、9天各个时间点的细胞总量、CyclinD1和CyclinE表达阳性的细胞数量，并按公式：阳性细胞比率=阳性细胞数量/细胞总量计算各时间点CyclinD1和CyclinE的阳性细胞比率；②对照组与各实验组hRIFs体外培养第1、3、5、7、9天CyclinD1和CyclinE表达阳性细胞的平均光密度值。
结果：1.原代培养5～7天后，组织块周围开始长出细胞，细胞形态以立方形和长梭形为主；大约2周后，占绝对优势的长梭形细胞可铺满瓶底。第2～5代细胞形态较为均一，多呈长梭形，胞浆丰富，1～2个核仁不等，细胞呈栅栏状排列，周围有长短不一的轴状突起，并有无定形成分分布于四周；ICC检测第2代细胞表达波形蛋白(vimentin)强阳性，角蛋白(keratin)散在灶性个别细胞弱阳性；第3～5代细胞均表达vimentin强阳性，结蛋白(desmin)和keratin阴性；染色体核型分析结果显示第2～5代细胞呈正常人体的二倍体核型表现。
2.同一浓度DS-201的IRA随培养时间的延长而逐渐升高；同一时间点，IRA随用药浓度的增加而升高。
3.体外培养第3、5、7、9天，各实验组PCNA阳性细胞平均光密度值相对于对照组显著降低(P＜0.05，P＜0.01)，第1天各组之间无统计学差异(P＞0.05)；同一时间点不同实验组之间两两比较平均光密度值无显著差异(P＞0.05)。
4.①体外培养1～9天，hRIFs细胞总量逐渐增加，生长曲线呈“S”形，第3～5天细胞数量增长最迅速，为对数生长期；CyclinD1、CyclinE表达阳性细胞的百分比在第5天最高，第3、5天CyclinD1、CyclinE阳性细胞平均光密度值显著高于第1、7、9天；②同一时间点各实验组与对照组相比，随用药浓度的升高，细胞总量逐渐减少，CyclinD1、CyclinE阳性表达的细胞数量也相应减少，细胞中阳性信号的颜色由棕黄色转变为淡黄色甚至呈阴性表达。用药后hRIFs形态由均一的梭形变成圆形、椭圆形、细长不规则条状等，且随着药物浓度的增大形态变化越明显；CyclinD1、CyclinE阳性细胞平均光密度值的变化规律较一致：第5天达到高峰，第7～9天逐渐下降；在培养的第1天各实验组与对照组比较，CyclinD1、CyclinE阳性细胞的平均光密度值无显著差异，在培养的第3、5、7、9天，DS-201组平均光密度值相对于对照组显著降低(P＜0.05，P＜0.01)；0.5mg/ml组CyclinD1阳性细胞平均光密度值3～5天逐渐增加(第3天1.2970±0.1052；第5天1.3814±0.5974)，而CyclinE平均光密度值下降(第3天1.3439±0.1263；第5天1.0873±0.3660)。
结论：1.体外成功培养出hRIFs，第3～5代细胞可作为实验供体。
2.DS-201对hRIFs体外增殖具有抑制作用，这种作用在培养的早期并不明显，可能与培养早期细胞多数仍处在G0期，进入细胞增殖周期的数目较少有关。
3.CyclinD1、CyclinE表达与hRIFs体外增殖有关，可能在RIF形成过程中发挥重要作用；DS-201影响hRIFs增殖可能是通过直接抑制G1期关键的细胞周期蛋白CyclinD1、CyclinE表达，阻滞细胞通过G1/S关卡，延长细胞周期实现的。
4.中药丹参中的主要成分丹参酮ⅡA具有抑制肾间质纤维化的作用，其水溶性成分药DS-201因水溶性增强而大大提高了丹参酮ⅡA的药物疗效，有望成为临床上用于治疗晚期肾脏病人RIF的药物。