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目的:肺癌是目前世界上最常见的恶性肿瘤之一,根据世界卫生组织(WorldHealth Organization, WHO)公布的资料显示,肺癌的发病率和死亡率在世界各国呈明显上升的趋势。对于早期肺癌的治疗,首选外科手术切除,但约60%左右的患者在就诊时就已发生远处转移,从而无法进行手术。尽管应用手术切除、放疗、化疗和生物治疗等多种综合治疗措施,但非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)和小细胞肺癌(small cell lung cancer, SCLC)的5年生存率未见明显提高。肺癌的发生是多病因、多途径共同参与和长期发展的复杂过程,其中包括环境因素影响、吸烟、家族遗传等,而基因异常改变则是最关键的因素。大量研究结果显示,抑癌基因表达下调或者缺失在肺癌的发生发展中发挥着极为重要的作用。DNA启动子区域CpG岛异常高甲基化,是抑癌基因表达失活的重要机制。因此,从表观遗传学角度出发,研究抑癌基因的启动子甲基化,探讨肿瘤发生、发展机制,并寻找有效的治疗靶点成为目前研究肿瘤发病机制的难点和热点。RAS相关结构域家族基因-10(Ras association domain family10, RASSF10)是近几年发现的一个新型抑癌基因,在儿童急性白血病、甲状腺癌、神经胶质瘤、黑色素瘤中表达异常,并有研究显示RASSF10基因与神经胶质瘤的预后有重要关系。但目前尚无研究结果显示RASSF10在肺癌中存在异常表达或DNA甲基化。本研究旨在分析RASSF10基因启动子甲基化在肺癌细胞株中的甲基化情况,并探讨去甲基化药物对RASSF10表达的影响及对细胞增殖、凋亡的影响,为研究肺癌发病机制提供新的理论依据和新的治疗靶点。方法:本实验采用亚硫酸氢盐修饰结合限制性内切酶分析法(CombinedBisulfite Restriction Analysis,COBRA)检测RASSF10基因在多种人肺癌细胞系(腺癌A549、NCI-H157、SPCA-1、大细胞癌NCI-H460、小细胞癌NCI-H446、鳞癌QG56)中RASSF10基因的启动子甲基化状况;应用不同浓度梯度的甲基转移酶抑制剂5-aza-dC(5-aza-2-deoxycytidine)处理甲基化阳性的细胞株,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测不同浓度药物对细胞中RASSF10基因mRNA表达的影响;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖活性;流式细胞仪检测细胞凋亡,运用统计学软件SPSS17.0对数据进行统计学分析。结果:1.COBRA分析法从67%(4/6)的人肺癌细胞株中检测到RASSF10启动子甲基化。其中SPCA-1细胞株为完全甲基化, H446、H157、H460细胞株为部分甲基化。2.5-aza-dC处理肺癌细胞株SPCA-1、H446后,RASSF10mRNA恢复表达或表达上调;MTT结果显示细胞存活率与药物浓度和作用时间呈负相关;流式细胞仪证实:与对照组相比,不同浓度的5-aza-dC处理细胞72h后,H446组的凋亡率从0.23%±0.10分别增长到15.09%±0.26和34.9%±0.32,SPCA-1组的凋亡率从0.77%±0.10,分别增长到为14.82%±0.23和35.4%±0.30。以上结果不同种系细胞组别之间无明显差异,实验组间差异具有统计学意义(p<0.05)。结论:1.首次发现新型抑癌基因RASSF10在人肺癌细胞系中发生了启动子甲基化;2.去甲基化药物5-aza-dC能有效恢复RASSF10mRNA的表达,RASSF10mRNA表达降低与其启动子甲基化有关;3.去甲基化药物5-aza-dC能抑制人肺癌细胞系H446、SPCA-1细胞体外生长、诱导细胞凋亡。