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露地菊是北方重要的园林绿化花卉之一,具有管理粗放、植株矮小、花色繁多等特点。质膜内在蛋白(Plasma membrane intrinsic proteins,PIPs)作为水孔蛋白超家族MIP家族的一员,能够调节植物细胞间水分平衡,参与渗透胁迫应答,调节气孔运动,在植物抗逆境胁迫中起到重要的作用。为研究露地菊CmPIP1和CmPIP2基因功能,选取了东北林业大学生命科学学院花卉生物工程研究所选育的五种露地菊:‘粉纱裙’、‘金秋’、‘紫涛’、‘火焰’、‘粉佳人’,在不同NaCl浓度培养下,探寻不同植株的抗盐能力,及叶片中Na+、K+的含量和CmPIP1/2基因相对表达量的关系。同时研究CmPIP1和CmPIP2在露地菊‘火焰’中的表达特性。利用实验室已构建的CmPIP1和CmPIP2的过表达和干涉载体,通过农杆菌侵染的方法,获得CmPIP1和CmPIP2的过表达和干涉露地菊‘火焰’转基因植株,并对转基因植株进行抗盐性验证,为培育出抗盐能力更强的露地菊新品系提供有力的分子基础,丰富盐碱地区花卉种植品种。本研究的主要结果如下: 1.露地菊‘粉纱裙’、‘金秋’、‘紫涛’、‘火焰’、‘粉佳人’分别在0mmol/L、100mmol/L、300mmol/L、500mmol/L NaCl处理下,根据测定叶片中K+/Na+含量比值,五种露地菊耐盐性由强到弱排列为:‘粉纱裙’,‘火焰’,‘粉佳人’,‘金秋’,‘紫涛’。在300mmol/L NaCl处理下,测定叶片中CmPIP1和CmPIP2的相对表达量,结果显示CmPIP1和CmPIP2表达量与K+/Na+含量比值关系密切,CmPIP1和CmPIP2与抗盐性密切相关。 2.在露地菊‘火焰’中,CmPIP1和CmPIP2在根、茎、叶、花、花蕾组织中均有表达,在叶片组织中表达量最高;CmPIP1和CmPIP2表达在叶片中具有昼夜节律。 3.通过潮霉素抗性筛选、Real-Time PCR和PCR检测,获得了CmPIP1和CmPIP2的露地菊‘火焰’过表达和干涉转基因株系。获得CmPIP1干涉转基因植株13株,CmPIP2干涉转基因植株6株,CmPIP1过表达转基因植株5株,CmPIP2过表达转基因植株16株。 4.分别选取3个CmPIP1和CmPIP2的过表达和干涉转基因株系,在300mmol/L盐胁迫下处理5天,CmPIP1/2过表达转基因植株长势良好,鲜重减少量小于野生型植株;CmPIP1/2干涉转基因植株萎蔫衰老情况加剧,鲜重减少量几乎与野生型植株一样;CmPIP1/2过表达和干涉转基因植株的根长伸长量大于野生型植株。在300mmol/L盐胁迫下处理3天,CmPIP1/2过表达转基因植株的MDA含量变化低于野生型植株,CmPIP1/2干涉表达转基因植株的MDA含量变化高于野生型植株。 由以上可得,CmPIP1和CmPIP2与露地菊抗盐性密切相关,CmPIP1和CmPIP2过表达转基因植株具有更强的抗盐能力。