论文部分内容阅读
背景:研制出安全、有效的血液代用品是解决血源紧缺这一世界难题的根本途径。血红蛋白类氧载体采用可生物降解高分子材料包裹血红蛋白,形成纳米级的人工红细胞。人工红细胞因具有与天然红细胞相似的核壳结构及较长的体内停留时间等优点,被认为是最有研究前景的血红蛋白类氧载体。目的:对新型淀粉纳米囊人工红细胞(NCAHbs)进行质量控制;并对新型淀粉纳米囊人工红细胞的有效性及安全性进行初步评价。方法:采用马尔文粒度仪、透射电镜、紫外分光光度计等方法,检测不同批次的NCAHbs粒径、包裹率、载药量及稳定性;采用大鼠重度失血性休克模型,比较不同类型复苏液体对失血性休克大鼠血流动力学指标及24h存活率的影响;测定NCAHbs复苏后大鼠肺组织SOD活性及MDA含量,并采用序贯法测定NCAHbs半数有效量ED50;氰化高铁血红蛋白法测定NCAHbs的体内停留时间T1/2。体外成纤维细胞培养,MTT法检测NCAHbs细胞毒性;通过大鼠尾静脉注射,检测NCAHbs对血小板数目、凝血酶原时间的影响;初步研究NCAHbs的异常毒性及急性毒性,测定半数致死剂量LD50,观察给药后14d内大鼠的临床表现及重要器官的病理变化。结果:不同批次的NCAHbs透射电镜显示形态规则、分散均匀,平均粒径为97.13±3.04nm,分散性PDI为0.039;马尔文粒度仪显示平均粒径为163.57nm,PDI为0.03;平均表面Zeta电位为6.79mv;pH为7.34±0.32,载药量为60.72%±1.14%、包裹率为78.25%±0.98%;P50为29mmHg、Hill系数为2.5,20℃储存一个月内无血红蛋白泄漏现象。NCAHbs能有效维持重度失血性休克大鼠的平均动脉压,无显著升压不良反应,能减轻缺血再灌注性肺损伤,ED50为1.13g/kg,95%可信区间为0.64~1.69g/kg;在体内半衰期为19.4~21.5h。NCAHbs无明显细胞毒性,未出现血小板数目及凝血酶原时间异常;无异常毒性,静注一定剂量以上对重要脏器有损伤,以肺、肾组织损伤为主,LD50为5.35g/kg,95%可信区间为2.37~6.85g/kg。讨论:新型淀粉纳米囊人工红细胞理化性质优良,质量稳定可控,具有良好的载氧-释氧能力,能够改善缺血再灌注的不良预后,具有一定的生物安全性,有望成为较为理想的血液代用品。