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该实验在观察E2F decoy DNA诱导雄激素非依赖性前列腺癌PC-3M细胞凋亡的基础上,应用RT-PCR、Western blot技术进一步研究E2F decoy DNA对某些癌基因如C-myc、CyclinD1表达的影响.首先,人工合成双链硫代E2F decoy DNA、ARE decoy DNA和Control decoy DNA,然后,通过脂质体把E2F decoy DNA转染入PC-3M细胞,并以ARE decoy DNA、Control decoy DNA作对照;在用倒置相差显微镜观察细胞形态变化、MTT法检测转染前后的细胞生长情况的基础上,用DNA凝胶电泳、流式细胞术(FCM)、等定性定量的方法研究细胞DNA的降解规律;同时用FCMC观察细胞周期分布及凋亡率;用RT-PCR检测C-myc mRNA及CyclinD1 mRNA表达、Western blot检测C-myc蛋白和CyclinD1蛋白的表达情况.结果显示:E2F decoy DNA转染PC-3M细胞48小时,其细胞形态改变符合凋亡的典型改变,MTT法检测细胞生长情况表明转染后48小时生长抑制最明显,转染后的DNA凝胶电泳出现典型的梯形条带(DNA ladder).FCM检测发现PC-3M细胞凋亡率26.35﹪.RT-PCR、Western blot发现E2F decoy DNA能抑制C-myc、CyclinD1癌基因的表达.而ARE decoy DNA、Control decoy DNA并不能诱导PC-3M细胞凋亡;不能抑制C-myc癌基因和CyclinD1癌基因的表达.上述结果表明:E2F decoy DNA能诱导雄激素非依赖性的前列腺癌细胞(PC-3M细胞).E2F decoy DNA可以抑制C-myc癌基因和CyclinD1基因的表达.这些表明,E2F decoy DNA诱导PC-3M细胞凋亡可能是通过多个环节,多个步骤来实现的,其详细机制还有待于进一步研究.总之,该实验的研究结果表明E2F decoy DNA与内源性的E2F的顺式作用元件竞争结合转录因子E2F,抑制E2F的转录活性,从而抑制子转录因子E2F的靶基因的作用.转录因子陷阱DNA策略为前列腺癌相关基因的功能研究及基因治疗提供了新的思路和方法.