酸性脲酶因能够耐受酸性环境,并且在大部分的低乙醇度酒精饮料中仍具有很高的活性,因而可以用来去除其所含有的尿素,从而降低酒精饮料中的氨基甲酸乙酯。本论文主要对来源于Enterobacter sp. R-SYB082的酸性脲酶进行了提取、纯化及性质研究。在细胞破碎阶段主要考察了高压匀浆法,结果表明在匀浆压力80MPa、匀浆3次、菌体浓度150g/L的条件下破碎效果最佳,细胞破碎率达到了90%,酶活收率为110%。在粗分离阶段应用聚乙二醇-磷酸氢二钾双水相体系对细胞破碎后的粗酶液进行萃取,结果表明在聚乙二醇分子量为4000,聚乙二醇浓度为15%,磷酸氢二钾浓度为10%,体系pH值6.0,NaCl浓度4%时,酸性脲酶的收率达到了83%,纯化倍数为4.5。粗酶经过Superdex200凝胶过滤层析和MonoQ离子交换层析后,回收率42%,纯化倍数为9.18。SDS-PAGE电泳为单一条带,其N端8个氨基酸残基序列为:Ser-Phe-Lys-Met-Asp-Arg-Lys-Gln。表明该条带为同种蛋白。凝胶过滤法测定全酶分子量为430kDa左右,SDS-PAGE测定分子量为72kDa左右,表明该酶为同源六聚体。酶反应的最适pH值为4.5,最适温度为35℃。酶的pH稳定范围为4.0-6.0,在25-55℃之间酶有较好的热稳定性,相对酶活都在80%以上。当酶液在较高温度(65℃)时,保存3h相对酶活仍在50%左右。在35℃,pH4.5时,该酶表观Km及Vmax分别为19.5μmol/L和109μmol urea/ min﹒mg。Na+、Mn2+对酶有一定的激活作用,Ca2+、Zn2+有一定的抑制作用,酒石酸、琥珀酸对酶有一定的激活作用,草酸、乙酸有一定的抑制作用。在两种不同的黄酒中按照0.05U/mL的酶量进行尿素去除实验,在37℃下,处理四天,尿素去除率分别达到了83%和79%。