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目的:通过检测凋膜止崩液子宫内膜细胞增殖,STAT3与FHIT mRNA和蛋白表达的影响,研究凋膜止崩液的抗子宫内膜非典型性增生症的作用,并探讨其可能的作用机制。 方法:本课题选取子宫内膜非典型性增生患者的子宫内膜组织,采用改良的子宫内膜细胞分离纯化方法,即胶原酶消化、二次筛网过滤和差速梯度离心相结合的方法获取原代腺上皮细胞和基质细胞。采用光学显微镜对分离的原代细胞进行形态学观察,通过免疫荧光法进行鉴定。首先取对数生长期的原代腺上皮细胞,用不同剂量的凋膜止崩液(12.5μg/mL、25μg/mL、50μg/mL)分别处理24 h和48 h,MTT实验检测细胞相对存活率,评价凋膜止崩液对腺上皮细胞增殖的影响。接着用不同剂量的凋膜止崩液处理原代腺上皮细胞48 h,提取细胞总RNA,经过反转录后,实时定量PCR检测STAT3与FHIT的mRNA水平,评价凋膜止崩液对STAT3与FHIT mRNA表达的影响。最后用不同剂量的凋膜止崩液分别处理原代腺上皮细胞和基质细胞48 h,提取细胞总蛋白,BCA法检测蛋白含量, Western blot法检测STAT3与FHIT蛋白水平,评价凋膜止崩液对STAT3与FHIT蛋白表达的影响。 结果: 1.本课题采取改良的子宫内膜腺细胞分离纯化方法,获得更多、纯度更高的上皮细胞和基质细胞。原代腺上皮细胞和基质细胞形态正常,且纯度分别90%和95%。 2.不同剂量的凋膜止崩液处理原代腺上皮细胞24h,均可抑制细胞增殖(P<0.5);处理48h,其抑制作用明显增强。凋膜止崩液可以浓度和时间依赖的方式抑制腺上皮细胞增殖。 3.不同剂量的凋膜止崩液处理原代腺上皮细胞48 h,与对照组比较,凋膜止崩液能以浓度依赖的方式降低STAT3 mRNA水平,提高FHIT mRNA水平,且高剂量组与对照组相比具有显著差异(P<0.05)。 4.不同剂量的凋膜止崩液分别处理原代腺上皮细胞和基质细胞48 h,与对照组比较,凋膜止崩液能以浓度依赖的方式抑制STAT3蛋白表达,促进FHIT蛋白表达,且高剂量组与对照组相比具有统计学差异(P<0.05)。 结论:凋膜止崩液可能通过在 mRNA和蛋白水平抑制 STAT3、促进 FHIT表达抑制子宫内膜细胞增殖,治疗子宫内膜增生症。本研究为子宫内膜增生症的治疗提供了新的思路,也为凋膜止崩液在子宫内膜增生症中的研究提供了理论和实验依据。