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目的观察SB203580对N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)诱导培养的皮层神经元凋亡作用的影响,探讨P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)信号通路与凋亡相关因子B细胞淋巴瘤/白血病-2基因蛋白(Bcl-2),B细胞淋巴瘤/白血病-2基因相关x蛋白(Bax)的关系,并判定信号转导通路抑制剂对凋亡的作用。方法培养7天原代大鼠皮层神经元,随机分为五组:对照组、损伤组、SB203580低剂量组(10μmol/L组)、SB203580中剂量组(100μmol/L组)、SB203580高剂量组(1000μmol/L组)。噻唑蓝(MTT)比色实验评价细胞生存力,乳酸脱氢酶(LDH)释放率测定细胞损伤程度,吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双重荧光染色观察细胞凋亡形态和数目,三者评定SB203580是否具有保护作用。应用免疫细胞化学法染色分析及免疫蛋白印迹分析统计大鼠皮层神经元各组p38MAPK,Bcl-2和Bax表达情况,从而探讨其可能的保护作用机制。结果①神经元鉴定:用免疫细胞化学ABC法,以抗神经元特异性烯醇化酶(NSE)抗体标记神经元,阳性神经元的比例为90.35%。②损伤模型的评估:不同浓度的NMDA对培养大鼠脑皮质神经细胞的损伤作用具有明显的剂量依赖关系。实验结果表明50μmol/L的NMDA对细胞的损伤以凋亡为主。③MTT法评价细胞生存力:与对照组比较,损伤组的OD值显著降低(P<0.01);与NMDA损伤组比较,SB203580低中高剂量组OD值均增高(P<0.01或P<0.05),有统计学差异。④LDH漏出率测定细胞损伤程度:与对照组比较,NMDA损伤组LDH漏出率极显著升高(P<0.01);与损伤组比较,SB203580低中高剂量组LDH漏出率明显降低(P<0.01),有极显著性差异;SB203580低中高剂量组间比较有显著性差异(P<0.05)。⑤AO/EB双重荧光染色可观察到凋亡细胞,低中高剂量组呈现剂量依赖关系,随着SB203580剂量的增加凋亡细胞数量减少。⑥免疫细胞化学法染色和免疫蛋白印迹结果显示:SB203580可以使Bax和P38MAPK表达下降,Bcl-2表达增加,与损伤组比较有统计学意义(P<0.01);低中高剂量组间比较有显著性差异(P<0.01),呈现剂量-反应关系。结论①SB203580对NMDA诱导的离体神经细胞的损伤有保护作用。与损伤组比较,各保护组细胞生存力增强;LDH释放率明显减少。②SB203580可以使p38MAPK和Bax表达下降,使Bcl-2表达增加,减少了细胞凋亡。③各实验组组间两两比较,各项实验指标均有统计学意义,说明在实验范围内SB203580的神经保护作用有剂量依赖关系;Bcl-2/Bax比值可以反映细胞的生存力。