背景与目的：　　呼吸道合胞病毒（Respiratory syncytial virus，RSV）感染是婴幼儿毛细支气管炎的主要原因，是导致儿童住院治疗最常见的危险因素。据WHO估计，在2015年全球范围内，每年大概有3500万5岁以下的儿童感染RSV，并导致约320万人住院治疗，约6万人住院死亡[1]；相比2005年的数据统计，儿童住院死亡率有所下降，但发病率仍然居高不下。肿瘤患者以及造血干细胞移植受者感染RSV后，可有较高的患病率和死亡率[2]；婴幼儿有过严重RSV下呼吸道感染，其成年后喘息性疾病发生率将比正常同龄人升高。目前RSV引起的下呼吸感染致病机制不甚明了，临床尚无安全有效的疫苗和抗病毒药物。　　我们前期研究工作发现，RSV感染离体培养的Calu-3细胞后CFTR氯离子通道基因表达水平上调、功能活动增强。本研究利用在体实验模型进一步验证RSV感染支气管上皮细胞后，CFTR氯离子通道基因表达水平是否上调。我们的研究为揭示RSV感染与毛细支气管炎、哮喘相关性以及进一步理解CFTR在喘息性疾病发生发展中的作用提供实验依据。　　实验方法:　　1.Hep-2细胞的培养及RSV病毒的增殖　　Hep-2 细胞来源于喉癌的上皮细胞株，购买于广州吉尼欧生物科技有限公司，培养液为DMEM培养基中加入10%热灭活的胎牛血清（Fetal bovine serum,FBS）及1%双抗（青霉素、链霉素），培养条件为37℃，5%CO2的培养箱，当细胞融合达到90%以上时，吸掉旧培养基，PBS洗涤2次，接种RSV A2亚型标准株（重庆医科大学附属儿童医院刘恩梅教授的惠赠），37℃，5%CO2 培养箱中吸附 2hrs，每 20min 摇晃一次，使病毒充分吸附均匀，吸附结束后吸弃病毒液，病毒在含2%FBS的DMEM培养基(病毒维持液)中，37℃，5%CO2条件下培养，逐日在倒置显微镜下观察，当细胞病变(Cytopathie Effect，CPE)达到75%～100%时刮取病毒培养液，4℃，12000离心10min收集上清并分装，-80℃储存备用。最后通过空斑实验检测病毒滴度。　　2.建立RSV感染BALB/c小鼠支气管上皮细胞模型　　实验组用RSV A2株滴鼻感染BALB/c小鼠，对照组用Hep-2细胞悬液滴鼻，在感染后的第 3、5 天，取小鼠肺组织分别进行肺组织病理切片、病毒分离，及琼脂糖凝胶电泳技术验证肺组织RSV G蛋白mRNA的存在。　　3.qRT-PCR技术检验BALB/c小鼠感染RSV后第7、14天CFTR基因表达的改变　　实验结果:　　1.经空斑实验测定，本实验所纯化RSV A2病毒滴度为3.6 ×106 PFU/ml。　　2.采用三种方法证明RSV成功感染小鼠呼吸系统。　　（1）RSV感染BALB/c小鼠第3天后，取肺组织匀浆液接种于Hep-2细胞上可引起细胞发生合胞体病变。　　（2）其次，提取感染3天后实验组及对照组病毒核酸，逆转录成cDNA，并通过琼脂糖凝胶电泳技术验证了病毒的存在。　　(3)感染第5天后，经HE染色，在光学显微镜下，可见明显炎症细胞浸润、肺组织病理损伤。　　3.模型建立成功后，取实验组与对照组小鼠的肺组织，随后提取总RNA，逆转录成cDNA，运用qRT-PCR法检测RSV感染BALB/c小鼠后CFTR mRNA的表达水平，结果mRNA表达 = 2（-△△CT）。于RSV感染BALB/c小鼠第7天时，实验组CFTR mRNA表达水平低于对照组（n=11，P<0.05）；于感染第14天时，实验组CFTR mRNA表达水平高于对照组（n=11，P<0.05）。　　实验结论:　　当小鼠在感染RSV第7天后，我们检测到支气管上皮细胞CFTR氯离子通道基因表达水平下调，而随着感染时间的延长，在第14天时，支气管上皮细胞CFTR氯离子通道基因表达水平上调。