论文部分内容阅读
目的 利用从云木香中提取得到去氢木香内酯单体化合物对抗喉癌的活性研究,并探讨去氢木香内酯抗喉癌的可能分子机制。方法 运用大孔树脂柱层析和重结晶的方法从云木香中分离得到去氢木香内酯单体化合物,并运用细胞培养技术、CCK-8法、Hoechst33258染色法、流式细胞技术、Western Blot实验、免疫荧光和免疫组化等实验方法来分析去氢木香内酯抗喉癌活性及其分子机制。在体内动物实验中,采用对BALB/C裸鼠进行皮下注射Hep-2细胞,建立Hep-2荷瘤裸鼠实验模型,探究去氢木香内酯在体内实验中的药理学作用,将去氢木香内酯腹腔注射的方式进入荷瘤裸鼠体内,并连续给药四周,检测实体瘤大小和对瘤体组织的蛋白进行相关实验检测。结果 对云木香中分离得到单体化合物进行鉴定并进行药理学实验,单体化合物确定为去氢木香内酯,并发现去氢木香内酯可抑制喉癌细胞的增殖及迁移,且抑制作用呈剂量-时间依赖关系。另外,在一定剂量下,去氢木香内酯对正常喉上皮细胞的细胞毒性较小,但去氢木香内酯可剂量依赖性的诱导喉癌细胞凋亡。通过Western blots、免疫组化以及免疫荧光等实验对去氢木香内酯抗喉癌的结果分析显示,去氢木香内酯可通过调控PI3K/Akt/Bad信号途径发挥抗喉癌作用;且去氢木香内酯促进促凋亡基因Bax的蛋白表达,抑制抑凋亡基因Bcl-2的蛋白表达,并活化Caspase-3、9、12以及促进Grp78和CHOP的表达来激活内在凋亡的信号传导途径从而使得喉癌细胞凋亡。结论 去氢木香内酯具有抑制喉癌细胞的增殖及迁移作用,且对正常的喉上皮HBE细胞毒性较少。体内外实验研究结果表明,去氢木香内酯可通过调控PI3K/Akt/Bad信号途径以及激活线粒体凋亡途径和刺激内质网应激反应来诱导喉癌细胞凋亡,以达到抗喉癌的作用。