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背景:准确快捷的诊断同种异体排斥反应是困难并具有挑战性的。目前对肝移植急性排斥反应而言,临床常用标志物为肝功能检测结果,但相关研究表明,肝酶的指标与急性排斥反应的有无并无关联;同时肝酶检测也不能将排斥反应与其他原因所致移植物功能异常区分开;而对于相关细胞因子及供体抗原特异性抗体(donor special antibody,DSA),免疫调节细胞CD4+CD25+Fop3+T细胞,外泌体及内含物半乳糖凝集素-9(galectin-9)等相关排斥反应标志物的研究,虽然给肝移植排斥反应的诊断提供了更多的选择,但其灵敏度和特异度及相关成本等方面在临床中应用可能会受到限制。在血管化复合同种异体移植(vascularized composite allograft,VCA)的相关研究中发现的一种方法是应用前哨皮肤移植(sentinel skin transplant,SST)技术——在进行同种异体复合组织移植的同时,将供体皮肤移植到同种异体的受体上,通过对前哨皮肤的组织病理学观察,来预判同时移植的移植物是否发生排斥反应。在VCA的前哨皮肤移植相关实验研究经验表明,在同种异体移植中发生的原发性的排斥反应与SST之间是一致的,而SST中出现的排斥反应可能先于同种异体移植物中的排斥反应,这给提前发现排斥反应提供了一种可能,从而给临床提前干预提供时间。在一些同时行肠道和腹壁移植的相关病例报告中提出,在同种异体肠移植出现排斥反应前腹壁移植的皮肤成分已经出现排斥反应,提前对腹壁排斥反应的治疗可以防止肠道排斥反应的出现。上述VCA及腹壁移植的相关经验,对SST在实体器官移植中的应用提供可能性,其可能被推广到其他实体器官移植中。肝移植和皮肤移植虽然有其不同特点,但二者具有相似的排斥反应途径,皆受Treg(regulatory t cells)、IFN(Interferon)、TGF-β(transforming growth factor-β)等因素影响。而在移植排斥反应中,同时移植肝脏和皮肤的病理改变是否一致,其中有没有相关联的机制目前尚不清楚。目的:本研究通过探索大鼠肝脏移植与皮肤联合移植模型建立的方法,建立稳定、可重复的动物模型,为后续研究前哨皮肤移植对肝移植排斥反应的预测价值,及皮肤移植与肝移植是否存在相关联的机制奠定基础。方法:本动物实验以SD大鼠为基础,以双袖套法进行大鼠原位肝移植,同时辅助性进行大鼠皮肤移植。实验分为2个阶段,第1阶段为预实验阶段,先进行SD→SD大鼠皮肤移植,随机配对分为两组,每组10对,采用背→背皮肤移植方法,两组受体采取不同皮瓣游离方式;另将20对大鼠纳入预实验组,行大鼠常规肝移植联合皮肤移植。此阶段以熟悉解剖结构,熟练操作顺序为主。第2阶段实验分为两组:常规移植组,行大鼠常规肝移植联合皮肤移植;改良移植组,行大鼠改良肝移植联合皮肤移植。每组纳入20对大鼠。记录3个实验组术中关键步骤耗时,术后存活率(术后48h存活为准),术后7天移植皮瓣存活情况等。采用SPSS22.0软件处理相关数据。结果:(1)两组受体皮瓣游离时间比较,采用两独立样本t检验,t=9.730,P<0.05,按α=0.05的检验水准,差异有统计学意义:可认为两组所用时间不同,受体不保留肉膜层游离皮瓣耗时更短。采用Fisher确切概率法分析两种方式术后7天皮瓣存活率是否相同,结果:P=0.011,按α=0.05,P<0.05,差异有统计学意义:可认为两组7天后皮瓣存活率不同。(2)预实验组与常规移植组主要手术步骤时间比较,供体手术时间(t=9.243),采用两独立样本t检验,P<0.05,差异有统计学意义;受体手术时间(Mann-Whitney U=0),无肝期(Mann-Whitney U=59.5),血管缝合时间(Mann-Whitney U=66.5),按α=0.05的检验水准,P值均<0.05,差异有统计学意义。可认为,常规移植组与预实验组的供体手术,受体手术,无肝期及肝上下腔静脉缝合的平均耗时不同,且常规移植组比预实验组平均耗时更短。采用?2检验分析两组大鼠术后存活率是否相同,结果显示?2=5.013,P=0.025,按α=0.05,P<0.05,可认为两组大鼠术后存活率不同。(3)常规移植组与改良移植组主要手术步骤时间比较,受体手术时间(Mann-Whitney U=78,P=0.001),无肝期(Mann-Whitney U=55.5,P<0.05),按α=0.05的检验水准,P值均<0.05,差异有统计学意义。常规移植组与改良移植组的无肝期,受体手术的平均耗时不同,且改良移植组比常规移植组平均耗时更短。采用?2检验分析两组不同手术方式的大鼠术后存活率是否相同,结果显示?2=4.800,P=0.028,按α=0.05,P<0.05,可认为两种手术方式的大鼠术后存活率不同。(4)模型建立失败的原因主要是大鼠肝移植手术失败,包括术中出血、袖套套管问题、气胸、血管吻合等。结论:建立大鼠肝脏与皮肤联合移植模型的过程比较复杂,难度较大,需要查阅相关文献,并通过反复练习掌握熟练的外科手术操作技术,从失败中总结经验教训和相关实验操作技巧,改进手术方法,才能提高手术成功率,获得稳定的肝脏与皮肤联合移植模型。