桦癌褐孔菌多糖诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡研究

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本文研究了桦癌褐孔菌多糖(FOPS)作用于体外培养的人肝癌HepG-2细胞株,观察其抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡的作用。采用噻唑蓝比色法(MTT法)测定了FOPS对人肝癌HepG-2肿瘤细胞的生长抑制作用;通过倒置显微镜和透射电子显微镜观察细胞凋亡的形态学变化;应用琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞的DNA片段;流式细胞仪检测细胞周期的改变及细胞凋亡率;RT-PCR法检测药物处理前后凋亡相关基因Bcl-2及BaxmRNA表达的变化。发现FOPS在体外对人肝癌HepG-2细胞的生长有明显的抑制作用。MTT检测结果发现FOPS对人肝癌HepG-2细胞株的增殖抑制作用呈剂量、时间依赖关系。通过倒置显微镜观察发现实验组细胞生长稀疏,胞浆透亮度下降,细胞脱落增多;透射电镜下观察,实验组细胞核染色质固缩、边集,核质内可见空泡,出现凋亡小体等。通过琼脂糖凝胶电泳观察到呈梯度的DNA片断。流式细胞仪检测结果,实验组均可见亚二倍体峰,且凋亡率随用药浓度的增加而增大,s期细胞所占百分比也随用药浓度的增加而上升,表明肿瘤细胞在S期聚集,阻止了向G2/M期的转换,从而影响了细胞周期。凋亡基因检测结果,用药组细胞中Bax mRNA的表达明显增强,而Bcl-2 mRNA的表达却无明显变化。结果表明:FOPS在体外可抑制HepG-2细胞的增殖,并可诱导HepG-2细胞发生凋亡,出现凋亡所特有的形态学及生化变化。FOPS诱导HepG-2细胞凋亡的机制可能与增强Bax的表达有关。提示FOPS的抗肿瘤作用可能与诱导细胞凋亡有关。
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