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目的：
检测肿瘤标记物14—3—3 α、Akt、P—Akt、p27Kip1和p57Kip2蛋白在乳腺癌中的表达，分析其与临床病理特征及Her-2的相关性，为乳腺癌防治提供新的靶点。
材料和方法：
本实验收集中山大学肿瘤防治中心病理科2002年存档的43例根治性手术切除的乳腺癌组织蜡块；另外选取10例癌旁正常组织石蜡标本。应用免疫组织化学技术(SABC)检测组织中14—3—3 σ、Akt及磷酸化Akt(phosphated—Akt)、p27Kip1和p57Kip2蛋白的表达，结合临床资料和随访资料，进行回顾性研究，作出评估。
结果：
1.14—3—3 σ蛋白阳性着色定位于胞浆内，在乳腺癌中阳性率为81.4％，显著高于正常乳腺组织中表达，P<0.01。14—3—3 σ蛋白的过量表达与乳腺癌肿瘤大小、淋巴结转移和临床分期关系密切。生存分析提示，乳腺癌患者的五年生存率随14—3—3 σ蛋白表达增加而逐渐降低。在乳腺癌组织中，14—3—3 σ蛋白在Her-2阳性组织中的表达水平高于在Her-2阴性组织，P<0.05。
2.Akt及P-Akt蛋白在乳腺癌中的阳性着色主要集中胞浆，显著高于相应的正常乳腺组织，P<0.01。Akt及P—Akt蛋白表达水平均与淋巴结转移和临床分期呈正相关。Akt和P—Akt蛋白过表达均提示五年生存率降低。在乳腺癌组织中，Akt和P—Akt蛋白均与Her-2的表达呈正相关。此外，Akt蛋白表达水平与ER、VEGF表达成正比，P<0.05或P<0.01。P—Akt蛋白表达水平与ER表达成正比，P<0.01。
3.p27Kip1蛋白在乳腺癌细胞核和细胞浆均有表达。胞核表达阳性率为51％，低于正常乳腺组织胞核表达(90％)，P<0.05;胞浆表达丰富，阳性率为72％，显著高于正常乳腺组织胞浆表达(20％)，P<0.01。p27Kip1蛋白错误的胞核定位与淋巴结转移和临床分期相关，P<0.05。p27Xip1蛋白胞核表达水平与淋巴结转移和临床分期呈负相关，而p27Kip1蛋白胞浆表达水平与淋巴结转移和临床分期呈正相关。生存分析表明，p27Kip1蛋白胞核和胞浆的错误定位可能影响乳腺癌的五年生存率。在乳腺癌Her-2阳性的组织中，p27kip1蛋白胞浆表达水平较高：反之，在乳腺癌Her-2阴性的组织中，p27Kip1蛋白胞核表达水平较高，P<0.05。此外，p27KiP1蛋白胞浆表达与PR、VEGF表达呈正相关，P<0.05。
4.P57KiP2蛋白在乳腺癌组织细胞核和细胞浆均有表达，其胞核阳性率为40％，低于在正常乳腺组织的表达率；胞浆阳性率为58％，高于在正常乳腺组织中的表达，但均不具有统计学差异。分析P57Kip2蛋白和临床病理因素及预后生存，均未发现明显相关性。P57Kip2蛋白在Her-2阳性和阴性组织中的表达与p27Kip1蛋白相似，但无统计学差异。
讨论：
本研究发现，在乳腺癌组织中14—3—3 σ、Akt及P—Akt蛋白过度表达：p27Kip1蛋白存在错误的核浆定位，其中细胞核中的阳性表达较正常组织降低，而细胞浆阳性表达较正常组织增加;p57xip2蛋白和p27Kip1蛋白表达相似。结合临床资料分析，14—3—3 σ、Akt及P-Akt、p27Kip1蛋白均与淋巴结转移和临床分期有关，说明14—3—3 σ、Akt及P—Akt、p27Kip1蛋白可能通过多种信号通路及调控细胞周期，从而促进或抑制乳腺癌细胞增殖，癌变。它们在乳腺癌形成和发展中扮演不同的角色，共同均参与乳腺癌的发生发展。
Her-2基因是乳腺癌重要的预后和预测性肿瘤标志物，它存在于乳腺细胞膜。本实验将乳腺癌标本按Her-2表达阴性和阳性分为两组，研究Her-2作为表皮生长因子受体存在或者缺失对乳腺癌细胞胞浆和胞核内其它蛋白的影响。实验表明在Her-2存在情况下，Akt/pAkt蛋白表达增加，促进肿瘤细胞的增殖。 14—3—3 σ蛋白与Akt/p—Ak蛋白表达相似。p27kip1蛋白的胞核表达在Her-2阳性乳腺癌组织中降低，而胞浆表达水平升高，提示Her-2可能促进p27kip1蛋白从胞核到胞浆释放并降解，失去负调控细胞周期的作用。
本研究分析了ER和PR与四种分子蛋白的关系，结果提示ER可能通过Her-2/表皮生长因子受体(EGFR)与胰岛素生长因子受体(IGFR)激活P13K/Akt途径或参与此通路。Akt和p27kip1蛋白胞浆表达与VEGF相关呈正相关，提示VEGF抗凋亡作用可能与PI3K-Akt通路有关。
本研究初步探讨了肿瘤相关标记物14—3—3 σ、Akt及P—Akt、p27Kip1和p57Kip2蛋白在乳腺癌的表达情况，分析了四种蛋白与临床病理因素和病人生存期之间的关系，有利于乳腺癌的临床诊断和病情判断。本研究探讨了Her-2蛋白表达水平的对四种分子的影响，以及它们与ER、PR和VEGF之间的关系。本研究下一步工作我们将在分子水平研究14—3—3 σ、Akt及P—Akt和p27Kip1蛋白之间的关系，以及它们在乳腺癌发生发展中的深入机制，为乳腺癌的诊断、治疗和判断预后提供新的有价值的指标。