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目的:肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是最重要的原发性肝癌,是世界范围内一种常见的癌症类型。在前期的全基因组测序芯片分析中,我们发现基因BARD1在HCC组织中存在显著上调。本研究旨在探究BRCA1相关的RING结构域1(BRCA1-associated RING Domain 1,BARD1)在HCC中潜在的临床、病理和预后价值以及在肝细胞癌中的作用及机制。方法:1.通过实时定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,q RT-PCR),检测BARD1 m RNA在209对匹配的肝癌组织样本和对应的癌旁肝组织(adjacent normal liver tissues,ANLT)样本中的表达情况。以及使用免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)检测70对匹配的肝癌组织样本和相应的ANLT样本中BARD1蛋白的表达水平。2.收集209例肝癌患者的临床病例资料,使用Kaplan-Meier分析评估肝癌患者的无进展生存期(progression-free survival,PFS)和总生存期(overall survival,OS),并通过单因素和多因素分析进一步评估BARD1的表达与肝癌患者预后之间的关系。3.使用由上海吉玛制药技术有限公司设计并合成的3对特异性BARD1基因的小干扰RNA(Small interfering RNA,si RNA)序列及1对阴性对照序列,瞬时转染肝癌细胞系SMMC7721和Huh7细胞,并于转染48小时后提取细胞总RNA并利用q RT-PCR技术检测小RNA的沉默效果。筛选最佳沉默效果的小RNA用于后续的细胞学功能实验。4.利用最佳沉默效果的si RNA-1构建的敲减BARD1的细胞模型,用于平板克隆实验来检测下调BARD1对肝癌细胞增殖的影响。5.利用si RNA-1沉默BARD1的肝癌细胞用于Transwell侵袭、迁移实验,来分析下调的BARD1对肝癌细胞侵袭、迁移等恶性生物学行为的影响。6.利用蛋白免疫印迹(Western blotting,WB)实验技术来分析下调BARD1的肝癌细胞中Akt、m TOR和MMP-9水平变化以及Akt、m TOR磷酸化水平的变化,用于探讨BARD1在肝癌进展中作用机制。结果:1.BARD1 m RNA水平和蛋白水平在肝癌组织样本中的表达显著高于癌旁肝组织。2.BARD1在肝癌患者中表达升高水平与肿瘤-淋巴结-转移分期(Tumor-Node-Metastasis,TNM)、巴塞罗那临床肝癌分期(Barcelona Clinic Liver Cancer,BCLC)、乙肝表面相关抗原(hepatitis B surface antigen,HBs Ag)、肿瘤大小、血清甲胎蛋白水平(alpha-fetoprotein,AFP)以及血清天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)水平呈正相关。单因素变量分析和多因素变量分析均显示BARD1是肝癌患者无进展生存期和总生存期的独立预测因子。3.体外细胞生物学实验表明,敲减BARD1表达能显著抑制肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移。4.沉默BARD1能下调Akt、m TOR和MMP-9等蛋白表达水平,并能抑制Akt(Ser473)和m TOR(Ser2248)的磷酸化信号传导途径。结论:BARD1在肝癌组织中明显上调,并促进肝癌细胞的恶性行为,同时BARD1的上调与肝癌患者的不良预后显著相关。此外,上调的BARD1可以通过靶向作用于Akt信号通路从而促进HCC的进展。因此,BARD1可能是HCC的一种新的诊断和预后生物标志物。